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文檔簡介
1、目的: 研究人類胚胎致死視覺異常蛋白(HuR)的表達情況及其與結(jié)直腸癌相關(guān)基因COX-2、MMP-9表達的相互關(guān)系,探討HuR在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用,進一步明確了細胞漿HuR表達作為結(jié)直腸癌相關(guān)重要靶蛋白mRNA穩(wěn)定因子的作用,為探討HuR有可能成為腫瘤治療分子途徑的潛在靶點提供依據(jù)。 材料和方法: 1.HuR在不同腫瘤細胞系的表達:選擇5種腫瘤細胞株和一種人正常細胞株研究HuR的mRNA和蛋白表達水平。各種
2、腫瘤細胞進行常規(guī)細胞培養(yǎng),利用免疫熒光方法分析HuR蛋白在六種細胞的表達定位。提取六種細胞RNA,應(yīng)用半定量RT-PCR方法檢測六種細胞HuR mRNA的表達情況并進行比較。 2.HuR在直腸癌的表達研究:采用高通量、反應(yīng)條件一致的組織芯片,應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法和原位雜交的方法研究HuR的表達及其與COX-2基因mRNA的關(guān)系,研究直腸癌組織中HuR蛋白的表達定位及其表達與直腸癌不同病理分級的關(guān)系。應(yīng)用原位雜交方法研究直腸癌組織
3、中COX-2 mRNA的表達,并對HuR漿表達與COX-2 mRNA的相互關(guān)系進行分析。統(tǒng)計學(xué)分析采用X<'2>檢驗。 3.結(jié)直腸癌HuR表達與MMP-9表達的關(guān)系:選擇臨床上經(jīng)病理證實的結(jié)直腸癌病人的癌組織及配對的癌旁正常組織23對及腺瘤標本4例,采用RT-PCR的方法檢測MMP-9的表達,采用免疫組化的方法檢測HuR的表達,分析MMP-9的mRNA表達水平與HuR表達的關(guān)系,同時分析其與臨床分期的關(guān)系。癌組織和癌旁正常組織M
4、MP-9的表達采用配對t檢驗,MMP-9與臨床分期的關(guān)系采用Kendall等級相關(guān)分析,MMP-9與HuR表達的相關(guān)性分析采用Mann.Whitney秩和檢驗。所有的分析均采用SPSS 11.5統(tǒng)計分析軟件進行。 結(jié)果: 1.HuR在不同腫瘤細胞系的表達:免疫熒光檢測結(jié)果顯示:LoVo,HT-29,MDA-MB-231,HepG2,3AO和ECV304中HuR蛋白均有表達,但是在不同腫瘤細胞的HuR蛋白的分布規(guī)律不同,L
5、oVo及HT-29中HuR蛋白呈明顯的細胞漿表達,而MDA-MB-231,HepG2,3AO 3種腫瘤細胞株主要以細胞核表達為主,但是也有細胞漿表達。而正常的人臍靜脈內(nèi)皮細胞系ECV304中HuR蛋白則只在細胞核表達。半定量RT-PCR檢測顯示:六種細胞中HuR mRNA表達水平?jīng)]有明顯差異,說明HuR在腫瘤細胞株的胞漿中表達有其特殊的意義。 2.HuR在直腸癌的表達研究:組織芯片的免疫組化結(jié)果顯示,直腸癌組織中HuR以細胞漿表
6、達為主,且不同病理分級HuR的表達有顯著性差異,P<0.01。不同病理分級COX-2 mRNA的表達無顯著性差異,P>0.05;腫瘤組織中細胞漿HuR表達與COX-2 mRNA表達的一致性比較高,具有明顯的相關(guān)關(guān)系,P<0.05,HuR漿表達與COX-2 mRNA表達有77.6%的一致性。 3.結(jié)直腸癌HuR表達與MMP-9表達的關(guān)系:結(jié)直腸癌組織HuR蛋白,在腫瘤組織主要為細胞漿表達為主,而在腺瘤和癌旁正常組織則為細胞核表達為
7、主。結(jié)直腸癌組織MMP-9 mRNA的表達水平在癌組織明顯高于臨近的正常組織,腺瘤組織不表達MMP-9。MMP-9 mRNA的表達比值與HuR的胞漿表達有明顯的正相關(guān),與腫瘤的lI缶床分級有明顯的正相關(guān)。 結(jié)論: 1.HuR mRNA在不同細胞的表達水平無明顯差異,但HuR蛋白在不同細胞中表達的部位和規(guī)律不同,在腫瘤細胞的胞漿分布,與其對許多腫瘤相關(guān)基因的表達調(diào)控異常有關(guān),為進一步研究其胞漿表達與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系奠定了
8、基礎(chǔ)。 2.HuR在直腸癌組織中主要呈細胞漿表達,表達程度隨直腸癌病理分級的增高而增加,并與COX-2 mRNA的表達有明顯的相關(guān)關(guān)系。HuR的胞漿分布可能與直腸腫瘤的發(fā)生發(fā)展有密切的關(guān)系,有待于進行進一步的功能研究。 3.HuR在結(jié)直腸癌的胞漿表達與MMP-9 mRNA在結(jié)直腸癌中高表達有相關(guān)關(guān)系。 HuR在結(jié)直腸癌的胞漿表達與腫瘤的臨床分級和組織分級有明顯的相關(guān)關(guān)系,其胞漿分布可以使COX-2及MMP-9等A
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