HuR在結直腸癌的表達及其與COX-2及MMP-9表達的相關關系研究.pdf

1、目的： 研究人類胚胎致死視覺異常蛋白(HuR)的表達情況及其與結直腸癌相關基因COX-2、MMP-9表達的相互關系，探討HuR在結直腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用，進一步明確了細胞漿HuR表達作為結直腸癌相關重要靶蛋白mRNA穩(wěn)定因子的作用，為探討HuR有可能成為腫瘤治療分子途徑的潛在靶點提供依據。 材料和方法： 1．HuR在不同腫瘤細胞系的表達：選擇5種腫瘤細胞株和一種人正常細胞株研究HuR的mRNA和蛋白表達水平。各種

2、腫瘤細胞進行常規(guī)細胞培養(yǎng)，利用免疫熒光方法分析HuR蛋白在六種細胞的表達定位。提取六種細胞RNA，應用半定量RT-PCR方法檢測六種細胞HuR mRNA的表達情況并進行比較。 2．HuR在直腸癌的表達研究：采用高通量、反應條件一致的組織芯片，應用免疫組織化學方法和原位雜交的方法研究HuR的表達及其與COX-2基因mRNA的關系，研究直腸癌組織中HuR蛋白的表達定位及其表達與直腸癌不同病理分級的關系。應用原位雜交方法研究直腸癌組織

3、中COX-2 mRNA的表達，并對HuR漿表達與COX-2 mRNA的相互關系進行分析。統計學分析采用X<'2>檢驗。 3．結直腸癌HuR表達與MMP-9表達的關系：選擇臨床上經病理證實的結直腸癌病人的癌組織及配對的癌旁正常組織23對及腺瘤標本4例，采用RT-PCR的方法檢測MMP-9的表達，采用免疫組化的方法檢測HuR的表達，分析MMP-9的mRNA表達水平與HuR表達的關系，同時分析其與臨床分期的關系。癌組織和癌旁正常組織M

4、MP-9的表達采用配對t檢驗，MMP-9與臨床分期的關系采用Kendall等級相關分析，MMP-9與HuR表達的相關性分析采用Mann．Whitney秩和檢驗。所有的分析均采用SPSS 11.5統計分析軟件進行。 結果： 1．HuR在不同腫瘤細胞系的表達：免疫熒光檢測結果顯示：LoVo，HT-29，MDA-MB-231，HepG2，3AO和ECV304中HuR蛋白均有表達，但是在不同腫瘤細胞的HuR蛋白的分布規(guī)律不同，L

5、oVo及HT-29中HuR蛋白呈明顯的細胞漿表達，而MDA-MB-231，HepG2，3AO 3種腫瘤細胞株主要以細胞核表達為主，但是也有細胞漿表達。而正常的人臍靜脈內皮細胞系ECV304中HuR蛋白則只在細胞核表達。半定量RT-PCR檢測顯示：六種細胞中HuR mRNA表達水平沒有明顯差異，說明HuR在腫瘤細胞株的胞漿中表達有其特殊的意義。 2．HuR在直腸癌的表達研究：組織芯片的免疫組化結果顯示，直腸癌組織中HuR以細胞漿表

6、達為主，且不同病理分級HuR的表達有顯著性差異，P<0.01。不同病理分級COX-2 mRNA的表達無顯著性差異，P>0.05；腫瘤組織中細胞漿HuR表達與COX-2 mRNA表達的一致性比較高，具有明顯的相關關系，P<0.05，HuR漿表達與COX-2 mRNA表達有77.6％的一致性。 3．結直腸癌HuR表達與MMP-9表達的關系：結直腸癌組織HuR蛋白，在腫瘤組織主要為細胞漿表達為主，而在腺瘤和癌旁正常組織則為細胞核表達為

7、主。結直腸癌組織MMP-9 mRNA的表達水平在癌組織明顯高于臨近的正常組織，腺瘤組織不表達MMP-9。MMP-9 mRNA的表達比值與HuR的胞漿表達有明顯的正相關，與腫瘤的lI缶床分級有明顯的正相關。 結論： 1．HuR mRNA在不同細胞的表達水平無明顯差異，但HuR蛋白在不同細胞中表達的部位和規(guī)律不同，在腫瘤細胞的胞漿分布，與其對許多腫瘤相關基因的表達調控異常有關，為進一步研究其胞漿表達與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關系奠定了

8、基礎。 2．HuR在直腸癌組織中主要呈細胞漿表達，表達程度隨直腸癌病理分級的增高而增加，并與COX-2 mRNA的表達有明顯的相關關系。HuR的胞漿分布可能與直腸腫瘤的發(fā)生發(fā)展有密切的關系，有待于進行進一步的功能研究。 3．HuR在結直腸癌的胞漿表達與MMP-9 mRNA在結直腸癌中高表達有相關關系。 HuR在結直腸癌的胞漿表達與腫瘤的臨床分級和組織分級有明顯的相關關系，其胞漿分布可以使COX-2及MMP-9等A