細(xì)絲蛋白A在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及其與MMP-9的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、目的:結(jié)直腸癌是常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率呈逐年增加的趨勢(shì)。其發(fā)生機(jī)制目前仍不明確,目前認(rèn)為是飲食、環(huán)境、遺傳因素等多因素作用的結(jié)果,還有研究證實(shí)有些疾病也與結(jié)直腸癌的發(fā)病有關(guān),例如:慢性炎癥,病程較長(zhǎng)的潰瘍性結(jié)腸炎形成的肉芽腫就與結(jié)直腸癌的發(fā)生有密切的關(guān)系。結(jié)直腸腺瘤也容易發(fā)生惡變。家族性息肉病的惡變率幾乎為百分之百。目前研究明確的為飲食和遺傳因素,在經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)區(qū)域,由于飲食結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,脂肪和蛋白質(zhì)攝入較多,纖維素?cái)z入減少,這都導(dǎo)致

2、了這一區(qū)域的結(jié)直腸癌發(fā)病率升高;在家族中有癌癥病史的后代患病幾率較正常人群高。在結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展以及轉(zhuǎn)移過(guò)程中有多種機(jī)制參與其中,在眾多因素中基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)已被大量研究證實(shí)在腫瘤的發(fā)生、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。目前關(guān)于FLNa與腫瘤發(fā)生、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的關(guān)系研究很少,在結(jié)直腸癌方面就更少。本研究利用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)結(jié)直腸癌組織MMP-9和FLNa為基本方法,在此基礎(chǔ)上探討兩者與結(jié)直腸癌患者發(fā)病的關(guān)系和兩者之間的關(guān)系,

3、并進(jìn)一步采用RT-PCR法在轉(zhuǎn)錄水平加以驗(yàn)證,利用Western印跡法在蛋白水平加以驗(yàn)證。探討MMP-9與FLNa在結(jié)直腸癌的發(fā)生、浸潤(rùn)以及轉(zhuǎn)移中的關(guān)系。
　　 方法:
　　 1：免疫組織化學(xué)法(SP法)檢測(cè)MMP-9和FLNa在結(jié)直腸癌患者的正常腸粘膜組織與腫瘤組織中的表達(dá),并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,進(jìn)而分析MMP-9與FLNa在腫瘤組織中的關(guān)系。
　　 2：采用RT-PCR法檢測(cè)MMP-9和FLNa在結(jié)直腸癌患者的正常

4、腸粘膜組織與腫瘤組織中的表達(dá),進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 3：采用Western印跡法檢測(cè)MMP-9和FLNa在結(jié)直腸癌患者的正常腸粘膜組織與腫瘤組織中的表達(dá),并進(jìn)行性統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 4：利用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析MMP-9和FLNa在腫瘤組織中的表達(dá)與結(jié)直腸癌的患者年齡、性別以及腫瘤的TNM分期、大小、形態(tài)、腸壁浸潤(rùn)深度、部位、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、肝轉(zhuǎn)移和組織學(xué)類型等臨床因素的關(guān)系。
　　 結(jié)果:
　　 1：

5、免疫組織化學(xué)(SP法)檢測(cè)
　　 MMP-9和FLNa在結(jié)直腸癌患者的正常腸粘膜組織與腫瘤組織中的表達(dá)結(jié)果顯示:MMP-9的陽(yáng)性顆粒位于細(xì)胞質(zhì)中,本實(shí)驗(yàn)60例結(jié)直腸癌患者的腫瘤組織的陽(yáng)性表達(dá)56例,表達(dá)陽(yáng)性率為93.33％;與之對(duì)照的是在正常腸粘膜組織的陽(yáng)性表達(dá)19例,表達(dá)陽(yáng)性率為31.67％。P＜0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;FLNa的陽(yáng)性顆粒位于細(xì)胞質(zhì)中。本實(shí)驗(yàn)60例結(jié)直腸癌患者的腫瘤組織的陽(yáng)性表達(dá)為30例,表達(dá)陽(yáng)性率為50.

6、00％;與之對(duì)照的是在正常腸粘膜組織的陽(yáng)性表達(dá)55例,表達(dá)陽(yáng)性率為91.67％。P＜0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Spearman檢驗(yàn)的結(jié)果證實(shí):MMP-9與FLNa在結(jié)直腸癌腺癌組織中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.339,P=0.008＜0.05)。
　　 2：RT-PCR法檢測(cè)MMP-9及FLNa在結(jié)直腸癌患者的正常腸粘膜組織與腫瘤組織中的表達(dá)
　　 結(jié)果顯示:MMP-9 mRNA在腫瘤組織中的表達(dá)水平(0.84±0.02

7、)比正常腸粘膜組織(0.21±0.01)高(P＜0.05,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義),FLNa mRNA在腫瘤組織中的表達(dá)水平(0.24±0.03)比正常組織(0.95±0.04)低(P＜0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。
　　 3：Western印跡法檢測(cè)MM-9和FLNa在結(jié)直腸癌患者的正常腸粘膜組織與腫瘤組織中的表達(dá)
　　 結(jié)果顯示:MMP-9蛋白在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)水平(0.86±0.03)比正常組織(0.19±0.02

8、)高(P＜0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義),FLNa蛋白在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)水平(0.15±0.02)比正常組織(0.76±0.04)低(P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。
　　 4：MMP-9和FLNa的表達(dá)程度與患者臨床以及病理因素間特征的關(guān)系
　　 經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示:與腫瘤的TNM分期、腸壁浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和肝轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性,但是與患者的年齡、性別、腫瘤部位、分化程度、大小、形態(tài)和組織學(xué)類型等無(wú)關(guān)。
　　

9、結(jié)論:
　　 1：MMP-9和FLNa的表達(dá)程度與患者的年齡、性別、腫瘤部位、分化程度、大小、形態(tài)和類型等無(wú)關(guān)。
　　 2：MMP-9的表達(dá)程度越高的患者腫瘤的TNM分期越晚、腸壁浸潤(rùn)越深、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移越多和有肝轉(zhuǎn)移。
　　 3：FLNa的表達(dá)程度越高的患者腫瘤的TNM分期越早、腸壁浸潤(rùn)越淺、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移越少(或無(wú))和無(wú)肝轉(zhuǎn)移。
　　 4：在檢測(cè)MMP-9與FLNa方面免疫組織化學(xué)法和RT-PCR以及West