細絲蛋白A在結直腸癌中的表達及其與MMP-9的關聯研究.pdf

1、目的:結直腸癌是常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率呈逐年增加的趨勢。其發(fā)生機制目前仍不明確,目前認為是飲食、環(huán)境、遺傳因素等多因素作用的結果,還有研究證實有些疾病也與結直腸癌的發(fā)病有關,例如:慢性炎癥,病程較長的潰瘍性結腸炎形成的肉芽腫就與結直腸癌的發(fā)生有密切的關系。結直腸腺瘤也容易發(fā)生惡變。家族性息肉病的惡變率幾乎為百分之百。目前研究明確的為飲食和遺傳因素,在經濟發(fā)達區(qū)域,由于飲食結構發(fā)生改變,脂肪和蛋白質攝入較多,纖維素攝入減少,這都導致

2、了這一區(qū)域的結直腸癌發(fā)病率升高;在家族中有癌癥病史的后代患病幾率較正常人群高。在結直腸癌的發(fā)生、發(fā)展以及轉移過程中有多種機制參與其中,在眾多因素中基質金屬蛋白酶9(MMP-9)已被大量研究證實在腫瘤的發(fā)生、浸潤和轉移中發(fā)揮重要作用。目前關于FLNa與腫瘤發(fā)生、浸潤和轉移的關系研究很少,在結直腸癌方面就更少。本研究利用免疫組織化學法檢測結直腸癌組織MMP-9和FLNa為基本方法,在此基礎上探討兩者與結直腸癌患者發(fā)病的關系和兩者之間的關系,

3、并進一步采用RT-PCR法在轉錄水平加以驗證,利用Western印跡法在蛋白水平加以驗證。探討MMP-9與FLNa在結直腸癌的發(fā)生、浸潤以及轉移中的關系。
　　 方法:
　　 1：免疫組織化學法(SP法)檢測MMP-9和FLNa在結直腸癌患者的正常腸粘膜組織與腫瘤組織中的表達,并進行統計分析,進而分析MMP-9與FLNa在腫瘤組織中的關系。
　　 2：采用RT-PCR法檢測MMP-9和FLNa在結直腸癌患者的正常

4、腸粘膜組織與腫瘤組織中的表達,進行統計學分析。
　　 3：采用Western印跡法檢測MMP-9和FLNa在結直腸癌患者的正常腸粘膜組織與腫瘤組織中的表達,并進行性統計學分析。
　　 4：利用統計學分析MMP-9和FLNa在腫瘤組織中的表達與結直腸癌的患者年齡、性別以及腫瘤的TNM分期、大小、形態(tài)、腸壁浸潤深度、部位、分化程度、淋巴結轉移情況、肝轉移和組織學類型等臨床因素的關系。
　　 結果:
　　 1：

5、免疫組織化學(SP法)檢測
　　 MMP-9和FLNa在結直腸癌患者的正常腸粘膜組織與腫瘤組織中的表達結果顯示:MMP-9的陽性顆粒位于細胞質中,本實驗60例結直腸癌患者的腫瘤組織的陽性表達56例,表達陽性率為93.33％;與之對照的是在正常腸粘膜組織的陽性表達19例,表達陽性率為31.67％。P＜0.05,差異有統計學意義;FLNa的陽性顆粒位于細胞質中。本實驗60例結直腸癌患者的腫瘤組織的陽性表達為30例,表達陽性率為50.

6、00％;與之對照的是在正常腸粘膜組織的陽性表達55例,表達陽性率為91.67％。P＜0.05,差異有統計學意義。Spearman檢驗的結果證實:MMP-9與FLNa在結直腸癌腺癌組織中的表達呈負相關(r=-0.339,P=0.008＜0.05)。
　　 2：RT-PCR法檢測MMP-9及FLNa在結直腸癌患者的正常腸粘膜組織與腫瘤組織中的表達
　　 結果顯示:MMP-9 mRNA在腫瘤組織中的表達水平(0.84±0.02

7、)比正常腸粘膜組織(0.21±0.01)高(P＜0.05,差異具有統計學意義),FLNa mRNA在腫瘤組織中的表達水平(0.24±0.03)比正常組織(0.95±0.04)低(P＜0.05,差異有統計學意義)。
　　 3：Western印跡法檢測MM-9和FLNa在結直腸癌患者的正常腸粘膜組織與腫瘤組織中的表達
　　 結果顯示:MMP-9蛋白在結直腸癌組織中的表達水平(0.86±0.03)比正常組織(0.19±0.02

8、)高(P＜0.05,差異有統計學意義),FLNa蛋白在結直腸癌組織中的表達水平(0.15±0.02)比正常組織(0.76±0.04)低(P＜0.05差異有統計學意義)。
　　 4：MMP-9和FLNa的表達程度與患者臨床以及病理因素間特征的關系
　　 經統計學分析顯示:與腫瘤的TNM分期、腸壁浸潤深度、淋巴結轉移和肝轉移具有相關性,但是與患者的年齡、性別、腫瘤部位、分化程度、大小、形態(tài)和組織學類型等無關。
　　

9、結論:
　　 1：MMP-9和FLNa的表達程度與患者的年齡、性別、腫瘤部位、分化程度、大小、形態(tài)和類型等無關。
　　 2：MMP-9的表達程度越高的患者腫瘤的TNM分期越晚、腸壁浸潤越深、淋巴結轉移越多和有肝轉移。
　　 3：FLNa的表達程度越高的患者腫瘤的TNM分期越早、腸壁浸潤越淺、淋巴結轉移越少(或無)和無肝轉移。
　　 4：在檢測MMP-9與FLNa方面免疫組織化學法和RT-PCR以及West