在線衍生—高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定血漿色氨酸及其代謝物.pdf

1、目的:
　　1.建立一種在線衍生高效液相色譜紫外-熒光法同時(shí)測(cè)定血漿中色氨酸（tryptophan，Trp），犬尿氨酸(kynurenine，Kyn)，5-羥吲哚乙酸(5-hydroxyindole acetic acid，5-Hiaa)和犬尿喹啉酸(kynurenic acid，Kyna)的濃度。
　　2.用所建立的方法測(cè)定正常孕婦，糖尿病患者，肝硬化患者和健康對(duì)照組血漿中Trp，Kyn，5-Hiaa和Kyna的含量，從而

2、更全面地了解人體內(nèi)不同生理和病理狀態(tài)下Trp代謝情況。
　　方法:
　　1.采用Hypersil C18柱（250mm×4.0mm;5μm）分離，以3-硝基酪氨酸（3-N-Tyr）為內(nèi)標(biāo)(IS)。流動(dòng)相為250 mmol/L醋酸鋅溶液(pH5.5)-乙腈(95∶5，v/v);流速0.8ml/min;柱溫30℃;進(jìn)樣量:50μL;紫外檢測(cè)波長(zhǎng)程序:0.00～13.00 min，360 nm;13.01～17.00min，302

3、 nm。熒光檢測(cè)波長(zhǎng)程序:0.00～10.00 min，激發(fā)光波長(zhǎng)(Ex)和發(fā)射光波長(zhǎng)(Em)分別為278 nm和343 nm;10.01～14.00 min，Ex和Em分別為244 nm和400 nm;14.01～17.00 min，Ex和Em分別為302 nm和400 nm;分析時(shí)間18min。
　　2.利用該方法測(cè)定糖尿病患者(n=101)，正常孕婦(n=70)，肝硬化患者(n=68)和健康對(duì)照組血漿(n=54)中Trp，K

4、yn，5-Hiaa和Kyna的含量。
　　結(jié)果:
　　1.5-Hiaa，Kyn，3-N-Tyr，Kyna和Trp保留時(shí)間分別為6.7，9.0，11.4，13.5，16.1 min。5-Hiaa，Kyn，Kyna和Trp線性范圍分別為:3.27～104.60 nmol/L,0.32～15.36μmol/L,14.0～464.8 nmol/L和2.5～320.0μmol/L，最低檢澳4限分別為:1.22 nmol/L，0.048

5、μmol/L，1.29 nmol/L和0.54μmol/L。4種物質(zhì)的平均回收率為91％～113％，日內(nèi)和日間變異系數(shù)均小于5％。
　　2.糖尿病患者血漿中5-Hiaa，Kyn，Kyna，5-Hiaa/Trp和Kyn/Trp均高于正常對(duì)照組(p＜0.01)，兩組間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.正常孕婦與正常對(duì)照組相比，Kyn，Kyna和Kyna/Kyn比值均降低(p＜0.05)，而5-Hiaa和Trp含量無顯著性差異。

6、r>　　4.肝硬化患者與正常對(duì)照組相比，Trp顯著降低(p＜0.01)，而5-Hiaa，Kyn/Trp，Kyn，Kyna，和5-Hiaa/Trp均增加(p＜0.05)。肝硬化患者白蛋白與Kyn濃度正相關(guān)，谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)與5-Hiaa濃度正相關(guān)，白球比值與Trp濃度正相關(guān)。
　　結(jié)論:
　　1.本文建立了一種在線衍生高效液相色譜-紫外/熒光法同時(shí)檢測(cè)血漿中Trp，Kyn，5-Hiaa和Kyna含量，該方法具有快速，靈敏，