高效液相色譜—熒光法同時(shí)測(cè)定肺癌患者血清色氨酸和酪氨酸.pdf

1、目的：
　　 1．建立一種簡單、快速并能同時(shí)測(cè)定血清中色氨酸(Trp)和酪氨酸(Tyr)的高效液相色譜-熒光檢測(cè)法(HPLC-FD)。
　　 2．初步探討肺癌患者中血清色氨酸(Trp)和酪氨酸(Tyr)含量測(cè)定的臨床意義。
　　 方法：
　　 1．血清標(biāo)本與等量5％(v/v)高氯酸溶液混合處理去蛋白后離心取上清液20uL直接進(jìn)樣分析。用Megres C18柱(250mmx4.6mm i.d.，5um)分離

2、；流動(dòng)相為10％(v/v)乙腈；流速1.2mL/min;熒光檢測(cè)波長：0-5min激發(fā)光波長228nm，發(fā)射光波長為306nm，5min后激發(fā)光波長285nm，發(fā)射光波長為353nm。室溫下9min內(nèi)完成分析測(cè)定。TRP和TYR均采用峰保留值比較法和疊加法進(jìn)行定性分析，用外標(biāo)法測(cè)定峰面積進(jìn)行定量分析。通過對(duì)線性范圍和檢測(cè)限、精密度、回收率和干擾試驗(yàn)的考察，對(duì)該方法進(jìn)行方法學(xué)評(píng)價(jià)。
　　 2．測(cè)定健康成人(n=120例)和肺癌患者

3、(n=80例)血清Tyr和Trp含量。探討肺癌患者血清Tyr和Trp含量變化及其在肺癌分型分期、早期診斷、機(jī)制研究等方面的臨床意義。
　　 結(jié)果：
　　 1．血清和標(biāo)準(zhǔn)品樣本的Tyr和Trp峰均分離良好，保留時(shí)間分別約為3.4和7.6min。Tyr的線性范圍為0.275-275umol/L，最低檢出濃度為0.004utmol/L，回收率為90.5％-108.8％;Trp的線性范圍為0.49-196umol/L，最低檢測(cè)濃

4、度為0.005umol/L，回收率為88.8％-97.2％。Tyr和Trp的日內(nèi)、日間測(cè)定的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于5％，苯丙氨酸(Phe)、5-羥色胺(5-i-rr)、犬尿喹啉酸(KYNA)、犬尿氨酸(KYN)和肌酐(Cre)等物質(zhì)對(duì)該法均無干擾。
　　 2.120例健康成人血清Tyr含量范圍為47.51～81.36umol/L，均值為(66.40±8.55)umol/L，血清色氨酸含量范圍為37.12～71.05umol/L，均值

5、為(49.93+5.43)umol/L。男女組比較，Trp含量有性別差異(P<0.001)，Tyr含量無性別差異（P>0.05）。與正常對(duì)照組比較，肺癌組血清Trp含量顯著降低(P<0.01)；腺癌(ADC)組血清Tyr和Trp含量顯著低于鱗癌(scc)組(P<0.05);Ⅲ-Ⅳ期與I-II期患者在Tyr和Trp含量間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:
　　 1．本文在國內(nèi)外首次建立HPLC-FD法同時(shí)測(cè)定血清Tyr和Tr