通則0512高效液相色譜法

1、通則通則05120512高效液相色譜法高效液相色譜法（20162016年3月2626日）(藥典四部藥典四部6060頁(yè))110高效液相色譜法：高效液相色譜法：系采用高壓輸液泵將規(guī)定的流動(dòng)相泵入裝有填充劑的色譜柱，對(duì)供試品進(jìn)行分離測(cè)定的色譜方法。注入的供試品，由流動(dòng)相帶入色譜柱內(nèi)，各組分在柱內(nèi)被分離，并進(jìn)入檢測(cè)器檢測(cè)，由積分儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄和處理色譜信號(hào)。1.1.對(duì)儀器的一般要求和色譜條件對(duì)儀器的一般要求和色譜條件高效液相色譜儀由高壓輸

2、液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、積分儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。色譜柱內(nèi)徑一般為3.9～4.6mm，填充劑粒徑為3～10μm。超高液相色譜儀：是適應(yīng)小粒徑（約2μm）填充劑的耐超高壓、小進(jìn)樣量、低死體積、高靈敏度檢測(cè)的高效液相色譜儀。（1）色譜柱色譜柱反相色譜柱：以鍵和非極性基團(tuán)的載體為填充劑填充而成的色譜柱。常見的載體有硅膠、聚合物復(fù)合硅膠和聚合物等；常用的填充劑優(yōu)十八烷基硅烷鍵合硅膠、辛基硅烷鍵合硅膠和苯基鍵合硅膠等。正相色譜柱：用硅膠填充

3、劑，或鍵合極性基團(tuán)的硅膠填充而成的色譜柱。常見的填充劑有硅膠、氨基鍵合硅膠和氰基鍵合硅膠等。氨基鍵合硅膠和氰基鍵合硅膠也可用作反向色譜。離子交換色譜柱：用離子交換填充劑填充而成的色譜柱。有陽(yáng)離子交換色譜柱和陰離子交換色譜柱。手性分離色譜柱：用手性填充劑填充而成的色譜柱。通則通則05120512高效液相色譜法高效液相色譜法（20162016年3月2626日）(藥典四部藥典四部6060頁(yè))310（3）流動(dòng)相）流動(dòng)相反相色譜系統(tǒng)的流動(dòng)相常用甲

4、醇－水系統(tǒng)和乙腈－水系統(tǒng)，用紫外末端波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，宜選用乙腈水系統(tǒng)，流動(dòng)相中應(yīng)盡可能不用緩沖鹽，如需用時(shí)，應(yīng)盡可能使用低濃度緩沖鹽。用十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱時(shí)，流動(dòng)相中有機(jī)溶劑一般不低于5%，否則導(dǎo)致柱效下降、色譜系統(tǒng)不穩(wěn)定。正相色譜系統(tǒng)的流動(dòng)相：常用兩種或兩種以上的有機(jī)溶劑，如二氯甲烷和正己烷等。品種正文項(xiàng)下規(guī)定的條件除填充劑種類、流動(dòng)相組分、檢測(cè)器類型不得改變外，其余如色譜柱內(nèi)徑與長(zhǎng)度、填充劑粒徑、流動(dòng)相流速、流動(dòng)相組分比例、柱溫

5、、進(jìn)樣量、檢測(cè)器靈敏度等，均可適當(dāng)改變，以達(dá)到系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)的要求。調(diào)整流動(dòng)相組分比例時(shí)，當(dāng)小比例組分的百分比例X小于等于33%時(shí)，允許改變范圍為0.7X～1.3X；當(dāng)X大于33%時(shí)，允許改變范圍為X10%～X10%。若需使用小粒徑（約2μm）填充劑，輸液泵的性能、進(jìn)樣體積、檢測(cè)池體積和系統(tǒng)的死體積等必須與之匹配；如有必要，色譜條件也應(yīng)作適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。當(dāng)對(duì)其測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生爭(zhēng)議時(shí)，應(yīng)以品種項(xiàng)下規(guī)定的色譜條件的測(cè)定結(jié)果為準(zhǔn)。當(dāng)必須使用特定牌號(hào)的