肺炎克雷伯氏菌基因轉(zhuǎn)化技術(shù)的研究.pdf

1、現(xiàn)有的外源DNA引入肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）的方法與外源基因轉(zhuǎn)化大腸桿菌的方法雷同，就是用克雷伯氏菌質(zhì)粒電穿孔轉(zhuǎn)化克雷伯氏菌。雖然文獻報道這種策略轉(zhuǎn)化克雷伯氏菌效率很高，但是過去十余年來幾乎沒有人引用。我們采用這種方案轉(zhuǎn)化克雷伯氏菌，轉(zhuǎn)化效率只有103/mg質(zhì)粒。這種低水平的轉(zhuǎn)化效率，限制了克雷伯氏菌的分子生物學研究。 造成克雷伯氏菌低水平的轉(zhuǎn)化效率可能與克雷伯氏菌厚厚的莢膜有關(guān)。這層莢膜既降

2、低了細菌比重，很難離心回收細菌；又使電擊或化學法在細菌表面打孔的難度加大。 我們采用莢膜合成缺陷株Mag A-，可以將細菌的轉(zhuǎn)化效率提高1-2個數(shù)量級，證實莢膜的確是克雷伯氏菌有效轉(zhuǎn)化的障礙。但是，轉(zhuǎn)化效率還是不能與大腸桿菌的轉(zhuǎn)化效率相比，提示還有其它的因素影響細菌的轉(zhuǎn)化效率。我們嘗試直接用質(zhì)粒電穿孔轉(zhuǎn)化固體培養(yǎng)基培養(yǎng)的肺炎克雷伯氏菌。出乎我們的意料，與液體培養(yǎng)基培養(yǎng)的克雷伯氏菌相比，固體培養(yǎng)基培養(yǎng)的克雷伯氏菌轉(zhuǎn)化效率至少可以提