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文檔簡介
1、目的：探討由胚胎干細胞(embryonic stem cells,ESCs)誘導的內皮細胞(Ec)與自體胚胎干細胞共培養(yǎng)時對ESCs成骨作用的影響
方法：雌雄小鼠合籠后，取13.5天的小鼠胚胎，制備成為原代胚胎成纖維細胞(PMEF)，加入專用培養(yǎng)液，運用絲裂霉素C處理制成培養(yǎng)胚胎干細胞的飼養(yǎng)層。再取受精后4～5天的小鼠，從子宮中取出囊胚進行培養(yǎng)，將內細胞團集落進行離散，將細胞在飼養(yǎng)層中進行體外培養(yǎng)傳代，并且采用類胚體培養(yǎng)和
2、核型分析進行ESC鑒定。再取ESC加入堿性成纖維細胞生長因子、血管內皮生長因子，將其誘導生成EC，并通過vWF免疫熒光檢測對EC進行檢測。培養(yǎng)細胞分為四組：A組胚胎干細胞組B組胚胎干細胞誘導組C組胚胎干細胞誘導生成的內皮細胞(Ec)誘導組D組(ESCs和誘導的EC聯(lián)合培養(yǎng)組)，通過干細胞形態(tài)的觀察、免疫熒光、細胞的增值、堿性磷酸酶的測定從酶學等不同方面觀測誘導的內皮細胞，細胞對胚胎干細胞向成骨細胞誘導轉化的影響。
結果：M
3、EF在接種30min后開始貼壁，90min后絕大多數(shù)細胞均已貼壁生長，細胞呈不規(guī)則的三角，48h后細胞逐漸變?yōu)殚L梭狀或纖維狀。ES細胞直徑12-15um，集落樣生長，呈圓形，集落邊緣光滑清晰呈扁平狀。通過細胞免疫熒光染色證實C組培養(yǎng)誘導的細胞為EC。D組ESCs和誘導的Ec聯(lián)合培養(yǎng)組MTT檢測結果各組細胞生長差異沒有顯著意義(P＞0.05)骨鈣素和堿性磷酸酶測定D組有明顯差異高于其他三組(P＜0.05)
結論：以胚胎干細胞
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