Apodemus胚胎干細胞和人胚胎干細胞向中胚層分化的研究.pdf

1、胚胎干細胞是來源于胚胎時期囊胚內細胞團的一種多潛能干細胞，能在體外自我更新，并且可以誘導分化為內胚層、中胚層和外胚層三個胚層來源的細胞，其中中胚層來源的細胞如脂肪細胞、成骨細胞、軟骨細胞和肌細胞等是目前細胞替代治療和組織工程中重要的種子細胞，因而在基礎研究和臨床治療中都有很好的應用前景。目前，體外中胚層來源的細胞主要由間質干細胞誘導分化而來，這是因為間質干細胞具有取材方便，分離培養(yǎng)簡單，多種分化潛能和免疫調節(jié)等優(yōu)點，但是間質干細胞自身也

2、存在著一些缺點，例如相對低的生產率，大約100，000個細胞中才有1個真正的干細胞；自我更新能力有限，而且隨著時間的延長，增殖潛能及向特定細胞分化的能力均消失殆盡。因而，仍需要發(fā)展一種新的細胞資源，所以是否能從胚胎干細胞中得到間質干細胞或其他中胚層來源的細胞理所當然的成為人們關注的新目標。所以，為了更好的探討胚胎干細胞向中胚層分化的問題，本研究利用已有的兩種胚胎干細胞一Apodemus和人胚胎干細胞，來分別研究它們向中胚層分化。首先應用

3、Apodemus胚胎干細胞，建立了生成脂肪細胞、成骨細胞、軟骨細胞和心肌細胞的體外分化模型，其次利用人胚胎干細胞，建立了一種獲得人胚胎干細胞來源的間質干細胞的新方法。 因此本研究分為兩個部分： 第一部分為Apodemus胚胎干細胞向中胚層誘導分化的研究。這部分內容主要包括：首先通過利用懸滴和懸浮培養(yǎng)方法，Apodemus胚胎干細胞形成擬胚體，然后通過不同的誘導液，擬胚體分別誘導分化成脂肪細胞、成骨細胞、軟骨細胞和心肌細胞

4、，最后這四種分化形成的細胞通過組化染色，細胞免疫染色及RT-PCR來進行鑒定。 第二部分為從分化的人胚胎干細胞中分選間質干細胞的研究。這部分內容主要包括：首先通過懸滴和懸浮培養(yǎng)方法，人胚胎干細胞形成擬胚體，接著擬胚體貼壁分化14天，然后利用C0271磁珠分選，從分化的人胚胎干細胞得到CD271陽性細胞，最后分選得到的陽性細胞進行包括生長周期、細胞核型、成瘤性、表面抗原和多向分化潛能等在內的多種生物特性方面的檢測。 結論：

5、 1.分化的人胚胎干細胞經CD271磁珠分選得到陽性細胞。CD271陽性細胞的細胞形態(tài)與BMMSCs相似，為長梭形，且能在體外擴增20代左右。 2.該細胞群體倍增時間為25.88小時，比BMMSCs增殖速度稍慢。 3.該細胞在體外培養(yǎng)過程中保持正常的核型并且沒有成瘤性。 4.表面抗原分析表明該細胞表達間質干細胞相關的表面分子，而不表達造血細胞的某些特異性表面分子。 5.該細胞在體外能夠分化為脂肪細