放射線對HeLa細(xì)胞TP，DPD酶表達(dá)的影響及意義.pdf

1、目的: 子宮頸癌有著較高的發(fā)病率，其治療主要還是以手術(shù)和放療為主，可使部分患者得到根治或緩解，但有部分患者單純放療仍然預(yù)后不佳。尤其是宮頸腺癌，不如宮頸鱗癌對放射線敏感，臨床期別較晚、淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移的患者，初始治療后很快又復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移。且其發(fā)病還有逐漸增加趨勢。因此為改善預(yù)后，臨床迫切需要探討對宮頸腺癌更為有效的療法。胸苷磷酸化酶(TP)二氫嘧啶脫氫酶(DPD)是卡培他濱(CAP)兩種主要代謝酶，腫瘤組織內(nèi)的這兩種酶是決定其化療有效

2、性的關(guān)鍵因素，有研究結(jié)果顯示，X線照射能增加某些人癌異種移植腫瘤組織類型中TP水平，提高了卡培他濱在腫瘤內(nèi)轉(zhuǎn)化為5-FU的濃度，與放療聯(lián)合應(yīng)用能明顯提高抗腫瘤療效，但放射線對宮頸腺癌TP酶及DPD酶的影響目前尚無研究報(bào)道。 本文通過宮頸腺癌HeLa細(xì)胞體外培養(yǎng)采用，采用ELISA及RT-PCR的方法對照射前后不同時間TP、DPD酶及其mRNA的表達(dá)進(jìn)行測定，探討了X線照射對宮頸腺癌細(xì)胞HeLa細(xì)胞TP、DPD酶的影響，為卡培他濱

3、與放射聯(lián)合用于宮頸腺癌的治療提供了依據(jù)。 材料與方法: 一、實(shí)驗(yàn)材料 1、細(xì)胞株：宮頸腺癌HeLa細(xì)胞株由中國醫(yī)科大學(xué)盛京醫(yī)院感染科實(shí)驗(yàn)室提供。 2、試劑：ELISA法測定TP酶的試劑盒購自德國羅氏公司；cDNA第一鏈合成逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、PCR試劑盒、Taq DNA、聚合酶DNA Marker均購自大連寶生物工程有限公司；TP、DPD引物由上海Invitrogen英俊生物技術(shù)有限公司合成； 二、實(shí)驗(yàn)

4、方法 宮頸腺癌HeLa細(xì)胞用含10％胎牛血清的1640培養(yǎng)基，于37℃、5％CO2飽和濕度條件的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)傳代培養(yǎng)，按X線照射的不同劑量分成對照組(OGy)、2Gy、4Gy、6Gy放射組。分別于照射前1天(第0天)，照射后第1天，第3天，第5天，第7天，第9天收集細(xì)胞， ELISA測定HeLa細(xì)胞照射前后TP酶蛋白含量按試劑盒說明進(jìn)行。RT-PCR檢測HeLa細(xì)胞放射前后TP，DPD酶mRNA表達(dá)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS12.0

5、軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，對照組與放射組之間差異采用t檢驗(yàn)。P<0.05為差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.01差異非常顯著。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果: HeLa細(xì)胞被放射后，與對照組相比，2Gy、4Gy、6Gy三個放射組的TP酶蛋白水平均有明顯提高，放射后第3天都升高達(dá)高峰，差別有顯著意義。放射后HeLa細(xì)胞TP酶的mRNA表達(dá)，在照射后第3天迅速升高達(dá)到高峰，明顯高于未經(jīng)照射的對照組，統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)P<0.05。其升高時間與ELISA測定的T