全反式維甲酸聯(lián)合放射線照射對食管癌細(xì)胞周期、凋亡及NF-κB、β-catenin、CyclinD1表達(dá)的影響.pdf

1、目的：我國是食管癌高發(fā)國，其死亡率居惡性腫瘤的第四位，嚴(yán)重影響了人類的生命和健康。由于大多數(shù)食管癌發(fā)病隱匿，多數(shù)患者就診時(shí)己屬中晚期，失去了手術(shù)的時(shí)機(jī)，因此尋找更為合理有效的治療方法成為食管癌治療領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)?；瘜W(xué)藥物治療在食管癌的綜合治療中占有越來越重要的地位。全反式維甲酸(ATRA)是迄今為止研究最為深入、作用最強(qiáng)的化療藥物之一，但單獨(dú)應(yīng)用ATRA毒副作用大，易產(chǎn)生繼發(fā)性耐藥。應(yīng)用放化療聯(lián)合，可以減少化療藥物的劑量，減輕其副作用，

2、達(dá)到協(xié)同增效的結(jié)果，因此探索ATRA與放射線聯(lián)合應(yīng)用是腫瘤研究的一個重要方向。 本研究選擇食管癌細(xì)胞Eca109作為研究對象，通過檢測ATRA聯(lián)合放射線照射對食管癌細(xì)胞周期、凋亡的影響及NF-KB、β-catenin、CyclinD1蛋白表達(dá)的調(diào)節(jié)，試圖為食管癌的臨床治療提供理論依據(jù)。 方法：1 MTT比色法檢測不同濃度ATRA作用24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)后對食管癌細(xì)胞Eca109生長抑制率的影響。選取ATRA作用4

3、8小時(shí)后抑制率約為25％、50％的藥物濃度作為流式細(xì)胞術(shù)及細(xì)胞免疫化學(xué)的檢測濃度。 2應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測Eca109細(xì)胞周期及凋亡率。實(shí)驗(yàn)分為：對照組：不做任何處理；ATRA處理組：終濃度分別為0.781amol/L、5μmol/L的ATRA；60Coγ放射線照射組： 6Gy單次照射；ATRA聯(lián)合60Coγ射線處理組：6Gy單次照射后分別加入0.78μmol/L、51μmol/L的ATRA。以上各組分別作用24小時(shí)、48

4、小時(shí)后上機(jī)檢測。 3采用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測51μmol/L ATRA處理48h前后Eca109細(xì)胞NF-κB/β-catenin、CyclinD1蛋白的表達(dá)情況。 4應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測各組Eca109細(xì)胞NF-κB、β-catenin、CyclinDl蛋白表達(dá)。實(shí)驗(yàn)分組方法同2。 5實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)軟件SPSS11.5處理，采用單因素方差分析、兩樣本的t檢驗(yàn)、直線相關(guān)分析，以α=0.05為差異顯著性標(biāo)準(zhǔn)。 結(jié)果：1

5、 MTT比色法檢測結(jié)果顯示：隨ATRA濃度的增加，Eca109細(xì)胞生長抑制率上升。各濃度組和對照組相比，有顯著性差異(P＜0.05)。 2.Eca109細(xì)胞在濃度為0.78gmol/L的ATRA作用24小時(shí)后，G0/G1期細(xì)胞比例由35.40±1.57％增至40.47±1.96％，當(dāng)ATRA濃度增加為5μmol/L時(shí)，G0/G1期細(xì)胞比例增至46.1 3±0.68％，兩組相比有顯著性差異（P＜0.05)；6Gy放射線照射后24小

6、時(shí)，G0/G1期細(xì)胞比例為38.73±1.33％；0.78μmol/L的ATRA與放射線聯(lián)合作用后24小時(shí)，G0/G1期細(xì)胞比例增至48.13±0.90％，5μmol/L的ATRA與放射線聯(lián)合作用，G0/G1期細(xì)胞比例增至51.30±1.04％，兩組相比有顯著性差異(P＜0.05)；ATRA聯(lián)合放射線作用組與各單獨(dú)作用組相比有顯著性差異(P＜0.05)；各作用組與對照組相比有顯著性差異(P＜0.05)。 ATRA、放射線及兩者聯(lián)

7、合分別作用48小時(shí)，Eca109細(xì)胞周期時(shí)相變化的分析結(jié)果與作用24d,時(shí)的分析結(jié)果一致。 3.Eca109細(xì)胞在濃度為0.78μmol/L的ATRA作用245時(shí)后，凋亡率由1.68±0.1 6％增至3.4 1±0.26％，當(dāng)ATRA濃度增加為5gmol/L時(shí)，凋亡率為5.03±0.23％，兩組相比有顯著性差異(P＜0.05)；6Gy放射線照射后24小時(shí)，凋亡率增至2.69±0.1 6％；0.78μmol/L的ATRA與放射線聯(lián)

8、合作用后245時(shí)，凋亡率為8.00±0.48％，5μmol/L的ATRA與放射線聯(lián)合作用，凋亡率增至11.44±0.5 1％，兩組相比有顯著性差異(P＜0.05)；ATRA聯(lián)合放射線作用組與各單獨(dú)作用組相比有顯著性差異(P＜0.05)；各作用組與對照組相比有顯著性差異(P＜0.05)。 ATRA、放射線及兩者聯(lián)合分別作用48小時(shí)，Eca109細(xì)胞凋亡的變化的分析結(jié)果與作用24小時(shí)的分析結(jié)果一致。 4濃度為5μmol/L的

9、ATRA的作用48d小時(shí)后，Eca109細(xì)胞NF-KB、β-catenin、CyclinD1陽性細(xì)胞表達(dá)率均降低，顯著低于對照組(P＜0.05)。 5 ATRA作用Eca109細(xì)胞24d小時(shí)、485時(shí)后，NF-κB、β-catenin、CyclinD1蛋白表達(dá)降低，且隨著藥物濃度的增加其蛋白表達(dá)降低顯著(P＜0.05)；放射線單獨(dú)作用24小時(shí)、48小時(shí)其蛋白表達(dá)降低較少；ATRA聯(lián)合放射線作用組與各單獨(dú)作用組相比有顯著性差異(P

10、＜0.05)，且隨著藥物濃度的增加其蛋白表達(dá)降低顯著(P＜0.05)；各作用組與對照組相比有顯著性差異(P＜0.05)。NF-κB、CyclinD1蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(P＜0.05)，β-catenin、CyclinD1蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(P＜0.05)，NF-κB、β-catenin蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(P＜0.05)。 結(jié)論：1 ATRA對Eca109細(xì)胞的生長抑制具有濃度依賴效應(yīng)關(guān)系，隨著濃度的增加細(xì)胞生長抑制率上升。 2