以病毒樣顆粒呈現(xiàn)HPV16 CTLs抗原表位對小鼠TC-1移植腫瘤的免疫干預研究.pdf

1、背景: 現(xiàn)有治療性HPV疫苗在宮頸癌人類臨床試驗中缺乏顯著療效。增強腫瘤抗原特異的殺傷效應(yīng)細胞免疫應(yīng)答是提升疫苗效果的重要策略。病毒樣顆粒(VLPs)在激發(fā)體液免疫中己證明具有高度免疫原性，是理想的疫苗載體。
　　目的: 本研究擬探討以VLPs形式呈遞HPV CTLs抗原肽，考察激發(fā)的特異細胞免疫應(yīng)答以及對腫瘤生長的干預，以揭示VLPs作為治療型疫苗載體的應(yīng)用潛能，并提供候選治療性HPV疫苗。
　　方法: 根據(jù)文獻報道選擇小

2、鼠中證明有效的4個HPV16E6、E7 CTLs表位，經(jīng)基因重組將其DNA片段克隆于乙肝核心抗原(HBcAg)優(yōu)勢抗原表位。重組蛋白在大腸桿菌中經(jīng)誘導表達，以硫酸銨鹽析法和蔗糖密度梯度離心純化，并經(jīng)高效液相凝膠過濾色譜和電鏡進行分析鑒定。制備的VLPs以預防性和治療性策略分別對小鼠TC-1細胞移植腫瘤進行免疫干預。研究檢測了小鼠腫瘤大小變化;脾細胞分離后經(jīng)特異抗原肽刺激，以ELISA檢測IFN-γ表達，以ELISPOT檢測分泌IFN-γ

3、的淋巴細胞，并以流式細胞分析儀檢測CD8+IFN-γ+細胞;此外，本研究還評價了VLPs疫苗刺激機體產(chǎn)生的免疫記憶，探討了體內(nèi)預存的抗載體抗體、VLPs結(jié)構(gòu)、免疫途徑等因素對抗原特異治療性VLPs疫苗免疫的影響。
　　結(jié)果: 重組蛋白在大腸桿菌中獲得了高效表達，純化的蛋白主要以VLPs形式存在;基于E7(49-57)表位的VLPs以預防性策略免疫小鼠后，完全抑制了移植腫瘤的生長;在治療性策略中，VLPs顯著抑制了2-3mm腫瘤的增

4、長，對于5-6mm甚至更大的腫瘤（8-9mm），VLPs疫苗免疫同樣顯示了明顯的腫瘤生長抑制作用;此外，VLPs疫苗刺激機體產(chǎn)生了有效的免疫記憶應(yīng)答，最少可持續(xù)15周;機體預存的抗載體抗體對VLPs疫苗發(fā)揮作用無顯著影響;抗原肽體外刺激脾細胞，結(jié)果顯示疫苗免疫小鼠脾細胞具有增強的IFN-γ表達，提高的分泌IFN-γ的淋巴細胞水平，以及增加的小鼠體內(nèi)CD8+IFN-γ+細胞數(shù)目。
　　結(jié)論: 呈遞HPV E7 CTLs表位的VLPs