以病毒樣顆粒呈現(xiàn)HPV16 CTLs抗原表位對(duì)小鼠TC-1移植腫瘤的免疫干預(yù)研究.pdf

1、背景: 現(xiàn)有治療性HPV疫苗在宮頸癌人類臨床試驗(yàn)中缺乏顯著療效。增強(qiáng)腫瘤抗原特異的殺傷效應(yīng)細(xì)胞免疫應(yīng)答是提升疫苗效果的重要策略。病毒樣顆粒(VLPs)在激發(fā)體液免疫中己證明具有高度免疫原性，是理想的疫苗載體。
　　目的: 本研究擬探討以VLPs形式呈遞HPV CTLs抗原肽，考察激發(fā)的特異細(xì)胞免疫應(yīng)答以及對(duì)腫瘤生長的干預(yù)，以揭示VLPs作為治療型疫苗載體的應(yīng)用潛能，并提供候選治療性HPV疫苗。
　　方法: 根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道選擇小

2、鼠中證明有效的4個(gè)HPV16E6、E7 CTLs表位，經(jīng)基因重組將其DNA片段克隆于乙肝核心抗原(HBcAg)優(yōu)勢(shì)抗原表位。重組蛋白在大腸桿菌中經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)，以硫酸銨鹽析法和蔗糖密度梯度離心純化，并經(jīng)高效液相凝膠過濾色譜和電鏡進(jìn)行分析鑒定。制備的VLPs以預(yù)防性和治療性策略分別對(duì)小鼠TC-1細(xì)胞移植腫瘤進(jìn)行免疫干預(yù)。研究檢測(cè)了小鼠腫瘤大小變化;脾細(xì)胞分離后經(jīng)特異抗原肽刺激，以ELISA檢測(cè)IFN-γ表達(dá)，以ELISPOT檢測(cè)分泌IFN-γ

3、的淋巴細(xì)胞，并以流式細(xì)胞分析儀檢測(cè)CD8+IFN-γ+細(xì)胞;此外，本研究還評(píng)價(jià)了VLPs疫苗刺激機(jī)體產(chǎn)生的免疫記憶，探討了體內(nèi)預(yù)存的抗載體抗體、VLPs結(jié)構(gòu)、免疫途徑等因素對(duì)抗原特異治療性VLPs疫苗免疫的影響。
　　結(jié)果: 重組蛋白在大腸桿菌中獲得了高效表達(dá)，純化的蛋白主要以VLPs形式存在;基于E7(49-57)表位的VLPs以預(yù)防性策略免疫小鼠后，完全抑制了移植腫瘤的生長;在治療性策略中，VLPs顯著抑制了2-3mm腫瘤的增

4、長，對(duì)于5-6mm甚至更大的腫瘤（8-9mm），VLPs疫苗免疫同樣顯示了明顯的腫瘤生長抑制作用;此外，VLPs疫苗刺激機(jī)體產(chǎn)生了有效的免疫記憶應(yīng)答，最少可持續(xù)15周;機(jī)體預(yù)存的抗載體抗體對(duì)VLPs疫苗發(fā)揮作用無顯著影響;抗原肽體外刺激脾細(xì)胞，結(jié)果顯示疫苗免疫小鼠脾細(xì)胞具有增強(qiáng)的IFN-γ表達(dá)，提高的分泌IFN-γ的淋巴細(xì)胞水平，以及增加的小鼠體內(nèi)CD8+IFN-γ+細(xì)胞數(shù)目。
　　結(jié)論: 呈遞HPV E7 CTLs表位的VLPs