主動(dòng)免疫AT1受體對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠血壓及靶器官重塑的影響.pdf

1、第一部分:主動(dòng)免疫AT1受體對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠血壓的影響 目的：觀察血管緊張素Ⅱ的Ⅰ型(AT1)受體細(xì)胞外不同肽段主動(dòng)免疫自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)，對(duì)血壓及心臟、腎臟功能的影響。 方法：2月齡SHR在血壓升高后，以合成的AT1受體細(xì)胞外的多肽片段ATR12185、ATR10014和ATR12181作為抗原，分別主動(dòng)免疫，用藥組給予氯沙坦(SHR-L，10mg·kg-1·d-1)灌胃。同齡Wistar大鼠免疫干預(yù)組同SH

2、R，對(duì)照組只用免疫佐劑。ELISA法檢測抗體滴度，大鼠尾動(dòng)脈血壓計(jì)測量血壓。測定血流動(dòng)力學(xué)，放射免疫法測定血漿及心臟局部血管緊張素Ⅱ的濃度，同時(shí)測定心臟/體重及左心室/體重，ELISA法測定24h尿微量白蛋白排泄量。 結(jié)果：SHR于2月齡血壓開始升高；所有免疫組動(dòng)物均產(chǎn)生了針對(duì)特定短肽的抗體。ATR12181免疫組SHR收縮壓于免疫后一個(gè)月降低，并持續(xù)至實(shí)驗(yàn)結(jié)束(145.42±8.46mmHg，n=7)，與SHR對(duì)照組(197.

3、00±7.70mmHg，n=7，P＜0.05)相比，收縮壓降低，與氯沙坦治療組(139.28±17.19mmHg，n=7，P＞0.05)相比，無顯著性差異，而ATR12185和ATR10014免疫組SHR收縮壓無明顯變化。Wistar大鼠免疫前后收縮壓無明顯變化。ATR12181免疫組SHR心臟/體重及左心室/體重降低。血流動(dòng)力學(xué)顯示，氯沙坦治療組SHR及ATR12181主動(dòng)免疫組SHR左室舒張末壓降低，血漿血管緊張素濃度升高。同時(shí)，A

4、TR12181主動(dòng)免疫組SHR尿微量白蛋白24小時(shí)排泄量降低。 結(jié)論：用ATR12181主動(dòng)免疫SHR，可降低SHR血壓，改善心臟及腎臟功能。 第二部分:主動(dòng)免疫AT1受體對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠靶器官重塑的影響 目的：觀察ATR12181主動(dòng)免疫后對(duì)心臟、血管及腎臟重塑的影響。 方法：ATR12181主動(dòng)免疫SHR，光鏡及電鏡觀察心肌、血管及腎臟病理及超微病理結(jié)構(gòu)變化；心肌組織VG染色，測量膠原體積比例(CV

5、F)和心肌血管周圍膠原面積與管腔面積的比例(PVCA)；測量腸系膜三級(jí)動(dòng)脈中膜厚度/管腔半徑及中膜面積/管腔面積。免疫組化觀察免疫組大鼠靶器官組織有無抗體沉積。 結(jié)果：ATR12181主動(dòng)免疫后，SHR心肌、血管及腎臟病理及超微病理結(jié)構(gòu)的損害明顯減輕。ATR12181主動(dòng)免疫后SHR，CVF(0.050±0.018)及PVCA(0.78±0.21)較SHR-C組CVF(0.087±0.021)及PVCA(1.36±0.32)明顯

6、降低，具有顯著性差異，P＜0.05；腸系膜三級(jí)動(dòng)脈中膜厚度/管腔半徑(1.10±0.18)及中膜面積/管腔面積(3.21±0.98)較SHR-C組(1.39±0.21)及(4.62±1.21)明顯降低，具有顯著性差異，P＜0.05。免疫組化觀察免疫組大鼠靶器官心臟、血管及腎臟組織中有抗體沉積。 結(jié)論：ATR12181主動(dòng)免疫SHR，抗體在免疫組大鼠心臟、血管及腎臟組織中有沉積，同時(shí)能夠逆轉(zhuǎn)心肌、血管及腎臟等靶器官的損害。

7、 第三部分:AT1受體免疫后對(duì)心肌原癌基因及AT1受體mRNA表達(dá)的影響 目的：觀察血管緊張素Ⅱ的Ⅰ型(AT1)受體細(xì)胞外不同肽段主動(dòng)免疫自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)，對(duì)心臟的原癌基因c-fos，c-junmRNA及AT1受體mRNA表達(dá)的影響。 方法：提取心臟總的RNA，采用RT-PCR產(chǎn)物半定量分析ATR12181免疫后心臟c-fos、c-jun以及AT1R的mRNA表達(dá)水平。 結(jié)果：ATR12181免疫SHR

8、組中c-fos，c-junmRNA及AT1受體mRNA水平較SHR-C對(duì)照組明顯下調(diào)，有顯著性差異，P＜0.05。與氯沙坦治療組相比，無顯著差異，P＞0.05。 結(jié)論：用ATR12181主動(dòng)免疫SHR，可以下調(diào)c-fosmRNA，c-jun及AT1受體mRNA水平，可能是其保護(hù)靶器官的作用機(jī)制之一。 第四部分:抗體對(duì)培養(yǎng)平滑肌細(xì)胞增殖及心肌細(xì)胞自發(fā)性搏動(dòng)的影響 目的：探討ATR12181主動(dòng)免疫自發(fā)性高血壓大鼠，

9、特異性抗體對(duì)體外培養(yǎng)的平滑肌細(xì)胞增殖及對(duì)培養(yǎng)的心肌細(xì)胞自發(fā)性搏動(dòng)、胞內(nèi)游離鈣的影響。 方法：培養(yǎng)血管平滑肌細(xì)胞，加入ATR12181免疫大鼠親和層析的抗體，按BrdU細(xì)胞增殖試劑盒方法通過ELISA檢測細(xì)胞增殖率。培養(yǎng)心肌細(xì)胞，加入純化抗體，觀察對(duì)心肌細(xì)胞自發(fā)性搏動(dòng)的影響；激光共聚焦顯微鏡觀察胞內(nèi)游離鈣的變化。 結(jié)果：AngⅡ?qū)ρ芷交〖?xì)胞增殖率明顯增加，而預(yù)先加入氯沙坦，則可以明顯抑制AngⅡ?qū)ρ芷交〖?xì)胞增殖。預(yù)

10、先加入AB，也可以明顯抑制AngⅡ?qū)ρ芷交〖?xì)胞增殖，與氯沙坦組相比，兩組之間無顯著性差異。0.1μMAngⅡ可以使心肌細(xì)胞搏動(dòng)數(shù)增加，預(yù)先加入不同滴度的AB，可以明顯抑制0.1μMAngⅡ?qū)π募〖?xì)胞搏動(dòng)數(shù)的增加。0.1μMAngⅡ可以使心肌細(xì)胞胞漿游離Ca2+熒光強(qiáng)度明顯增強(qiáng)，預(yù)先加入1μM氯沙坦，可以明顯抑制AngⅡ使心肌細(xì)胞胞漿游離Ca2+熒光強(qiáng)度增加的作用。預(yù)先滴度為1:40的AB，可以明顯抑制AngⅡ增加心肌細(xì)胞胞漿游離Ca