仿刺參精多糖的提取純化及其活性研究.pdf

1、海參是一種在中國沿海的重要海洋食品，含有多種功能性成分及多種保健功能。近年來，海參多糖逐步在海參保健功能的研究中占有了重要地位，研究重點包括抗腫瘤、增強免疫等。在海參的加工過程中，海參精作為海參的副產(chǎn)物之一，經(jīng)常會被丟棄，這樣既造成了浪費，也污染了環(huán)境。因此，本課題選擇海參中具有較高經(jīng)濟價值的仿刺參中的海參精為實驗材料進行多糖的提取和活性研究。首先對其進行不同蛋白酶酶解的工藝優(yōu)化：單因素實驗和響應面實驗，然后采用不同的方法對酶解得到的仿

2、刺參精粗多糖(SCSCP)進行逐步的分離純化得到四個組分(SCSPA1、SCSPA2、SCSPB1、SCSPB2)，最后對各分離組分分別進行理化性質(zhì)的測定及抗腫瘤和抗氧化活性初步研究，以期為海參精副產(chǎn)物中多糖的生產(chǎn)及應用提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。結(jié)果如下：
　　1.仿刺參精多糖的提取
　　選擇兩種應用廣泛的蛋白酶，以多糖得率為指標，將添酶量、酶解溫度和酶解時間作為重要的影響因子，首先進行了兩種單酶各個因素取值范圍的確定，然后進

3、行了響應面優(yōu)化試驗，最后對雙酶酶解添加比例進行了篩選實驗。結(jié)果表明：木瓜蛋白酶單酶的提取率較高，添酶量為3％、酶解溫度為49℃、酶解時間為6 h時，其得率可達10.64‰。
　　2.仿刺參精多糖的純化及理化性質(zhì)分析
　　多糖SCSCP經(jīng)DEAE Sepharose Fast Flow柱層析得到SCSPA1和SCSPA2兩個主要組分，對SCSPA1進行葡聚糖凝膠SephadexG-200凝膠柱層析純化得到SCSPB1，對SCS

4、PA2進行SephadexG-200純化得到SCSPB2，分別對分離純化到的各組分進行理化性質(zhì)的分析。
　　結(jié)果：首先，在化學組成方面，SCSCP、SCSPA1、SCSPA2、SCSPB1和SCSPB2的多糖含量分別為31.07%、40.03%、45.27%、44.62%、50.73%；蛋白含量分別為21.18%、19.43%、7.52%、10.36%、6.61%；糖醛酸含量分別為3.81%、3.14%、1.73%、3.50%、2

5、.97%；硫酸根含量分別為12.39%、10.07%、17.71%、12.66%、21.33%。其次，紫外和紅外光譜掃描結(jié)果表明五種多糖組分在多糖的特征吸收區(qū)域內(nèi)均有吸收峰。最后，在單糖組成方面，甘露糖、氨基葡萄糖、乳糖、半乳糖和巖藻糖均被SCSPB1和SCSPB2所含有，但兩者所含單糖含量有所差異，而氨基半乳糖鹽酸鹽只被SCSPB2所特有。
　　采用MTT法對仿刺參精多糖及其純化組分進行Hela和HepG2腫瘤細胞增殖能力的體外

6、抑制試驗表明：Hela細胞和HepG2細胞的培養(yǎng)時間不同SCSCP抑制效果也不同，五種多糖抑制細胞生長強弱順序依次為SCSPB2＞SCSPA2＞SCSPB1＞SCSPA1＞SCSCP。當SCSPB2濃度為10 mg/mL時，對培養(yǎng)72 h的Hela細胞和HepG2細胞的抑制率分別為85.63%和88.46%，表明具有顯著的體外抗腫瘤活性。
　　4.仿刺參精多糖的抗氧化活性研究
　　本文對分離組分進行了：DPPH·、羥基自由基

7、（OH·）和超氧陰離子自由基（O2-·）清除活性的測定。結(jié)果表明在三種自由基清除上，粗多糖及其純化組分都發(fā)揮了不同的作用。所有組分都在O2-·的清除實驗上呈現(xiàn)出微弱的能力，但不同組分之間有一定的區(qū)別；在其余兩個自由基清除實驗中各個多糖組分均呈現(xiàn)出較強的能力，且互相之間也有差別。其中，對三種自由基SCSPB2的能力最強，在DPPH·、OH·和O2-·的清除試驗中，當SCSPB2的添加濃度為4 mg/mL時，清除率分別達到66.64%、52