半邊蓮多糖的提取純化工藝及其免疫活性研究.pdf

1、　　目的：探討半邊蓮多糖的提取、純化工藝,并優(yōu)化其工藝條件,研究半邊蓮多糖的免疫活性,為進(jìn)一步開發(fā)半邊蓮藥材奠定基礎(chǔ)。
　　方法：1、以半邊蓮多糖得率及糖含量為指標(biāo),輔以綜合加權(quán)評(píng)分法,分別考察半邊蓮多糖的水提取工藝、微波提取工藝及超聲波提取工藝的各項(xiàng)影響因素,包括料液比、提取溫度(功率)、提取時(shí)間、提取次數(shù)等,并以正交試驗(yàn)確定最佳提取工藝。2、以半邊蓮多糖脫蛋白(色)率及多糖保留率為指標(biāo),輔以綜合加權(quán)評(píng)分法,分別考察半邊蓮多糖

2、的 H2O2 脫色工藝、脫蛋白工藝、大孔吸附樹脂純化工藝的各項(xiàng)影響因素,包括 H2O2用量、pH、脫蛋白(色)溫度、酶解溫度、酶解時(shí)間、酶用量以及徑高比、最大上樣量、洗脫流速、洗脫劑用量等因素,并以正交試驗(yàn)確定各自最佳純化工藝。3、以正常小鼠及免疫低下小鼠的巨噬細(xì)胞吞噬指數(shù)、吞噬百分率、溶血素、溶血空斑的形成為指標(biāo),以香菇多糖混懸液為陽性對(duì)照藥,生理鹽水為空白對(duì)照藥,考察不同濃度下半邊蓮多糖溶液對(duì)正常小鼠及免疫低下小鼠的機(jī)體免疫力的影響

3、。
　　結(jié)果：研究表明1、半邊蓮多糖常規(guī)水提取工藝最佳條件為：以料液比為1：15溫度90℃的反應(yīng)體系下,提取3次,每次1h；微波提取工藝最佳條件為：加藥材30倍量水,于560W微波提取3次,每次30min；超聲波提取工藝最佳條件為：加藥材30倍量水,超聲功率400W提取4次,每次30min。2、半邊蓮多糖H2O2脫色最佳工藝條件為：對(duì)10mg/mL的半邊蓮多糖溶液10mL進(jìn)行脫色,加入2mL H2O2并調(diào)節(jié)pH至8,于70℃水浴

4、脫色效果最佳；半邊蓮多糖脫蛋白純化最佳工藝條件為：對(duì) 10mg/mL 的半邊蓮多糖溶液 10mL,以酶底比為 1.0%加入木瓜蛋白酶,在溫度為40℃pH6.0的反應(yīng)體系中酶解1.5h脫蛋白效果最佳；大空吸附樹脂最佳純化工藝為：稱取D101型樹脂25g,選取徑高比約為1：8.5濕法裝柱,最大上樣量為130mL,洗脫流速為0.3mL/min,洗脫劑用量為520mL即可獲得最佳純化效果。3、小鼠的免疫藥理研究表明：小劑量半邊蓮多糖可提高正常小

5、鼠及免疫低下小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬指數(shù),并促進(jìn)溶血素和溶血空斑的形成,具有較好的增強(qiáng)免疫力的作用；而大劑量的半邊蓮多糖可降低正常小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬指數(shù),并抑制溶血素和溶血空斑的形成,具有一定的抑制免疫的作用。
　　結(jié)論：通過一系列的驗(yàn)證試驗(yàn)確定本研究所優(yōu)化的半邊蓮多糖提取純化工藝條件切實(shí)穩(wěn)定可行,經(jīng)純化所得半邊蓮多糖得率為 24.65%,糖含量為 76.28%,藥理實(shí)驗(yàn)證明半邊蓮多糖有增強(qiáng)機(jī)體免疫力的功效,可用于相關(guān)藥物及保