普羅布考預處理對高脂飲食誘導肥胖大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用及機制.pdf

1、第一部分普羅布考對高脂飲食誘導肥胖大鼠系統(tǒng)性炎癥及腦內小膠質細胞激活的影響
　　目的:觀察普羅布考對高脂飲食誘導肥胖大鼠脂代謝、體內氧化應激、系統(tǒng)性炎癥及腦內小膠質細胞激活的影響，探討其對神經保護的潛在價值。
　　方法:將40只SD大鼠隨機分為兩組:NG16只:給予普通飼料喂養(yǎng)，8周末隨機抽取8只大鼠(NG8W)處死進行相關實驗研究，剩余8只(NG16W)繼續(xù)給予普通飼料喂養(yǎng)。高脂飲食組(HG)24只，高脂飼料喂養(yǎng)8周后隨機

2、抽取8只大鼠(HG8W)處死進行相關實驗研究。第9周開始把高脂飲食組剩下的大鼠隨機分為兩亞組:高脂飲食組(HG16W)8只及普羅布考干預組(PB16W)8只，兩組均繼續(xù)給予高脂飼料喂養(yǎng)，PB組每天6pm給予5％普羅布考混懸液100mg/d.kg灌胃1次共8周，NG16W及HG16W組均給予不含普羅布考的0.5％羧甲基纖維素鈉灌胃。各組大鼠處死前禁食12h并稱重和測量體長，麻醉處死后采集血漿、肝臟、脂肪、腦等組織標本，計算大鼠Lee's指

3、數、體脂指數和肝指數，測定血漿TC,TG, LDL, ox-LDL, HDL, FBS, FINS, ALT, AST, hs-CRP, TNF-α, IL-1β, IL-6,SOD，MDA，T-AOC水平，計算HOMA-IR（FIRI）值，HE染色觀察腹部脂肪和肝臟組織病理學變化，免疫組織化學測定腦組織中Iba-1表達情況。
　　結果:各組大鼠體重均隨著周齡增大而逐漸增加，12周后HG組體重明顯高于NG組(p＜0.05)，在8、

4、16周末HG組lee's指數、肝指數、體脂指數明顯高于NG組(p＜0.05)，普羅布考干預后，PB16W組體重增長減緩，lee's指數、肝指數、體脂指數較HG16W組下降明顯(p＜0.05)。
　　在第8、16周末NG、HG兩組空腹血糖無顯著性差異，而HG組Fins及FIRI明顯高于NG組(p＜0.05)。普羅布考干預后，PB16W組FIns及FIRI較HG16W組明顯改善(p＜0.05)，但略高于NG16W組(p＞0.05)。<

5、br>　　在16周末HG16W組大鼠肝臟ALT、AST水平明顯高于NG16W組(p＜0.05)，出現重度肝脂肪變性，脂肪細胞直徑也明顯增大，存在炎性細胞浸潤，普羅布考干預后，PB16W組與HG18W比較ALT、AST及肝脂肪變性程度明顯下降(p＜0.05)，脂肪細胞直徑減小，炎性細胞浸潤減輕。NG16W組ALT、AST正常，無肝脂肪變性。
　　在第8、16周末HG組TG、TC、LDL-C、Ox-LDL明顯高于同期NG組(p＜0.0

6、5)，HDL-C水平無明顯差異(p＞0.05)。普羅布考干預后，PB16W組TG、TC、LDL-C、Ox-LDL較HG16W組明顯下降(p＜0.05)，但仍明顯高于NG16W組(p＜0.05)，HDL-C水平也明顯降低(p＜0.05)。
　　在16周末HG16W組hs-CRP、TNF-α、IL-1β、IL-6等炎癥因子及脂質過氧化產物MDA水平明顯高于NG16W組(p＜0.05)，SOD活力及T-AOC水平明顯低于NG16W組(p

7、＜0.05);普羅布考干預后，PB16W組血漿hs-CRP、TNF-α、IL-1β、IL-6較HG16W組明顯降低(p＜0.05)，血漿MDA顯著減少(p＜0.05)，SOD、T-AOC較HG16W組明顯恢復(p＜0.05)，
　　在16周末HG16W組大鼠腦內Iba-1表達（OD值）明顯增加，普羅布考干預后PB16W組Iba-1表達與HG16W組比較明顯減輕。
　　結論:高脂飲食誘導肥胖大鼠模型表現出血脂異常、胰島素抵抗、

8、非酒精性脂肪肝等代謝綜合征表現，還存在全身抗氧化能力下降、慢性低度系統(tǒng)性炎癥狀態(tài)和腦內小膠質細胞激活。普羅布考干預可改善高脂飲食誘導肥胖大鼠全身胰島素抵抗，抗氧化儲備，減輕系統(tǒng)性炎癥狀態(tài)和腦內小膠質細胞激活。
　　第二部分普羅布考預處理對高脂飲食誘導肥胖大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用
　　目的:觀察普羅布考對缺血再灌注損傷腦組織抗氧化能力、炎癥及小膠質細胞激活的影響，探討普羅布考預處理對高脂飲食誘導肥胖大鼠腦缺血再灌注損傷的

9、保護作用及機制。
　　方法:將160只大鼠隨機分為五組，每組32只:假手術組（Sham）、正常對照組(NG)、正常干預組(NG+PB)、高脂對照組(HG)、高脂干預組(HG+PB)。NG+PB組:普通飼料喂養(yǎng)8周后，每天給予5％普羅布考(100mg/d.kg)灌胃1次共8周;Sham及NG組:給予普通飼料喂養(yǎng)8周后，每天給予等容積不含普羅布考的0.5％羧甲基纖維素鈉(CMC)灌胃1次共8周;HG+PB組:高脂飼料喂養(yǎng)8周后每天加予

10、5％普羅布考(100mg/d.kg)灌胃1次共8周;HG組:高脂飼料喂養(yǎng)8周后每天給等量不含普羅布考的0.5％CMC灌胃共8周。Sham組行假手術，其余四組于實驗第16周末線栓法制作左側大腦中動脈腦缺血再灌注損傷模型，缺血2小時再灌注24小時后進行神經功能缺損評分，處死動物采集腦標本，TTC染色測定腦梗死體積(n=8)，干濕重法測定腦組織含水量(n=8)，免疫組化法測定腦組織中IL-1β、TNF-α、Iba-1蛋白水平(n=8)，缺血皮

11、質腦組織勻漿后測定IL-1β、TNF-α、SOD、MDA、NO、NOS、iNOS含量(n=8)。
　　結果: Sham組無神經功能缺損，HG組大鼠神經功能評分明顯高于NG組(P＜0.05); NG+PB組評分略低于NG組(P＞0.05); HG+PB組大鼠組評分明顯低于HG組(P＜0.05)。
　　NG+PB組腦含水量稍高于Sham組(P＞0.05)，其余各組腦含水量明顯高于Sham組(P＜0.05); NG組大鼠腦含水量明

12、顯高于NG組(P＜0.05); NG+PB、HG+PB兩組腦含水量明顯低于對應的NG、NG組（均P＜0.05）;HG+PB組腦含水量高于NG+PB組(P＜0.05)。
　　Sham組未見腦梗死灶;HG組大鼠腦梗死體積比明顯高于NG組(P＜0.05);NG+PB、HG+PB兩組大鼠腦梗死體積比明顯低于對應的NG、NG組（均P＜0.05）;HG+PB組腦梗死體積比仍高于NG+PB組(P＜0.05)。
　　免疫組織化學染色結果表明

13、，各組缺血側腦組織中Iba-1、IL-1β、TNF-α的表達（OD值）均高于Sham組（均P＜0.05），HG組表達均高于NG組（均P＜0.05）;NG+PB、HG+PB兩組表達均較對應的NG、NG組減少（均P＜0.05）;但HG+PB組仍高于NG+PB組(P＜0.05)。
　　各組缺血再灌注各組腦組織SOD活力均較Sham組明顯下降，而MDA含量增高(P＜0.05); HG組大鼠腦組織SOD活力較NG組下降明顯，而MDA、IL-

14、1β、TNF-α含量明顯增高(P＜0.05);兩干預組腦組織SOD活力均較相應對照組明顯升高，而MDA、IL-1β、TNF-α含量較相應對照組明顯下降(P＜0.05)。各組腦組織中NO、NOS、iNOS水平均較Sham組明顯升高(P＜0.05)，HG組較NG組更加明顯(P＜0.05)，兩干預組腦組織NO及其合成酶NOS、iNOS活力均較相應模型組下降(P＜0.05)，NG+PB組和HG+PB組差異不明顯(P＞0.05)。
　　結論

15、:高脂飲食誘導肥胖大鼠缺血再灌注后腦組織氧化應激和炎癥因子表達水平較普通大鼠明顯升高，小膠質細胞激活及腦水腫更明顯，梗死體積更大，神經功能評分更高，腦損害更嚴重。普羅布考預處理可顯著增高高脂飲食誘導肥胖大鼠腦缺血再灌注后腦組織抗氧化能力，降低含氮自由基及炎癥因子的表達，減少腦內小膠質細胞的激活。普羅布考預處理可改善高脂飲食誘導肥胖大鼠腦缺血再灌注后神經功能缺損，減輕腦水腫和腦梗死體積，保護腦缺血再灌注損傷。
　　第三部分普羅布考預

16、處理對高脂飲食誘導肥胖大鼠腦缺血再灌注損傷大腦皮層細胞凋亡及相關蛋白表達的影響
　　目的:觀察普羅布考預處理對高脂飲食誘導肥胖大鼠腦缺血再灌注損傷后神經細胞凋亡和腦組織中相關凋亡因子及通路的影響，進一步探討普羅布考對腦缺血再灌注損傷的保護機制。
　　方法:將80只大鼠隨機分為五組，每組16只:假手術組（sham）、正常對照組(NG)、正常干預組(NG+PB)、高脂對照組(HG)、高脂干預組(HG+PB)。NG+PB組:普通飼

17、料喂養(yǎng)8周后，每天給予5％普羅布考(100mg/d.kg)灌胃1次共8周;sham及NG組:給予普通飼料喂養(yǎng)8周后，每天給予等容積不含普羅布考的0.5％羧甲基纖維素鈉(CMC)灌胃1次共8周;HG+PB組:高脂飼料喂養(yǎng)8周后每天加予5％普羅布考(100mg/d.kg)灌胃1次共8周;HG組:高脂飼料喂養(yǎng)8周后每天給予給予等量不含普羅布考的0.5％CMC灌胃共8周。Sham組行假手術，其余四組于實驗第16周末制作大鼠大腦中動脈腦缺血再灌注

18、損傷模型，缺血2小時再灌注24小時后TUNEL法檢測缺血大腦皮層凋亡細胞數，Western Blot法測定Bcl-2、caspase-3、Akt、p-Akt蛋白表達水平。
　　結果:(1) Sham組大腦皮層偶見凋亡細胞，HG組大鼠缺血大腦皮層凋亡細胞數較NG組明顯增多(P＜0.05)，NG+PB組及HG+PB組經普羅布考預處理凋亡細胞數顯著減少（均P＜0.05），HG+PB組凋亡細胞數仍高于NG+PB組(P＜0.05)。

19、　　(2) NG組大鼠大腦皮層中Bcl-2表達水平較假手術組無明顯變化(P＞0.05)，HG組Bcl-2表達水平較NG組升高(P＜0.05);與NG、HG組比較，普羅布考預處理能夠顯著上調NG+PB組及HG+PB組Bcl-2表達水平（均P＜0.05）。腦缺血再灌注各組大腦皮層caspase-3蛋白表達均較假手術組增加(P＜0.05)，NG+PB組及HG+PB組經普羅布考預處理caspase-3表達水平顯著下調(P＜0.05)，HG+PB

20、組caspase-3表達仍高于NG+PB組(P＜0.05)。
　　(3)各組大腦皮質Akt總蛋白表達水平各組間無明顯變化(P＞0.05)。NG組Ser473 p-Akt蛋白水平均較假手術組略升高(P＞0.05)，余各組Ser473 p-Akt蛋白水平均較假手術升高(P＜0.05)，普羅布考預處理能夠顯著增加NG+PB組及HG+PB組Ser473 p-Akt蛋白水平(P＜0.05)。
　　結論:高脂飲食誘導肥胖促進腦缺血再灌注