mGluRⅠ的激活在中性粒細胞與內皮細胞相互黏附中的調節(jié)作用.pdf

1、谷氨酸(glutamate，Glu)是中樞神經系統(tǒng)中一類重要的興奮性神經遞質，通過激活谷氨酸受體(glutamatereceptors，GluRs)發(fā)揮作用。Glu過度激活其受體所引起的興奮性神經毒性在神經損傷的發(fā)生中具有重要作用。近年來一些研究者注意到在中樞神經系統(tǒng)外的外周非神經組織也廣泛存在GluRs的表達，但它們的生理及病理意義遠未闡明。本研究室的前期研究發(fā)現(xiàn)，親離子型谷氨酸受體中的N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受體的激活可以

2、通過促進中性粒細胞與血管內皮細胞之間的黏附而加重急性肺損傷。但代謝型谷氨酸受體在此過程中有何影響未見報道。本實驗通過觀察I組代謝型谷氨酸受體(groupImetabotropicglutamatereceptor,mGluRI)在中性粒細胞與內皮細胞上的表達，以及該受體的激活對中性粒細胞與內皮細胞黏附的影響，并對其可能機制進行研究，為深入研究肺臟等外周組織中谷氨酸受體的生理及病理意義，拓展肺部疾病機制及防治的研究提供新的思路。
　

3、　 方法：取健康人新鮮靜脈血Ficoll-Hypaque密度梯度離心法分離中性粒細胞，培養(yǎng)人正常臍靜脈內皮細胞(humannormalumbilicalveinendothelialcells，HUVE-12)，免疫細胞化學法和Realtime-PCR法檢測中性粒細胞和內皮細胞mGluRI(包括mGluR1和mGluR5)的表達，分別應用不同濃度，不同時間的mGluRI的特異性激動劑S-3，5．二羥基苯甘氨酸(S-3，5-dihydr

4、oxy-phenylglycine，S-DHPG)處理中性粒細胞和內皮細胞，通過比色法檢測中性粒細胞和內皮細胞的黏附率，采用流式細胞技術測定中性粒細胞黏附分子CDlla和內皮細胞黏附分子ICAM-1表達的變化。
　　 結果：
　　 1．中性粒細胞和內皮細胞中有mGluRI的mGluR1和mGluR5的mRNA和蛋白表達。
　　 2．S-DHPG在10-8～10-6mol/L濃度范圍內作用于中性粒細胞呈劑量依賴性提

5、高中性粒細胞與內皮細胞之間的黏附率(p

6、phenylglycine，(±)-MCPG]0.5mmol/L可以顯著阻斷激動劑S-DHPG(10-6mol/L，lh)的促黏附及促CDlla表達效應（P<0.01）。
　　 3．S-DFPG在10-8～10.6mol/L濃度范圍內作用于內皮細胞呈劑量依賴性提高中性粒細胞與內皮細胞之間的黏附率(P<0.05或P<0.01)；10-6mol/L的S-DHPG單獨作用于內皮細胞0.5h，即可促進中性粒細胞黏附于內皮細胞（p<0.0

7、1）；隨著作用時間的延長，中性粒細胞黏附于內皮細胞的比率并不隨之增加；10-6mol/L的S-DHPG單獨作用于內皮細胞可促ICAM-1表達(P<0.01)；mGluRI拮抗劑(±)-MCPG(0.5mmol/L)可以顯著阻斷激動劑S-DHPG(10-6mol/L，lh)的促黏附效應及促ICAM-1表達效應(P<0.01)。
　　 結論：
　　 1．中性粒細胞和內皮細胞均可表達mGluRl/5受體。
　　 2．中