NMDA受體在中性粒細胞與內(nèi)皮細胞相互粘附中的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的：谷氨酸(glutamate，Glu)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)重要的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，在哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)中廣泛分布并在包括學(xué)習(xí)、記憶、腦的發(fā)育以及突觸可塑性等方面發(fā)揮重要作用，Glu過度激活其受體所引起的興奮性神經(jīng)毒性在神經(jīng)損傷的發(fā)生中也有重要地位。研究發(fā)現(xiàn)谷氨酸NMDA受體在外周有廣泛表達，推測其在外周組織中有重要的生理和病理意義。本研究在本實驗室早期發(fā)現(xiàn)NMDA受體阻斷劑MK-801可以減輕內(nèi)毒素肺損傷的基礎(chǔ)上，觀察NMDA對中性粒細胞

2、與內(nèi)皮細胞粘附的影響，并對其可能機制進行研究，論證NMDA受體的激活可通過促進中性粒細胞與內(nèi)皮細胞相互粘附而加重肺內(nèi)炎癥過程的假說，為臨床急性肺損傷防治的研究提供新的靶點。 方法：采取新鮮人全血分離中性粒細胞和人臍靜脈內(nèi)皮細胞ECV304的培養(yǎng)，采用不同濃度(10<'-9>～10<'-3>)NMDA分別處理中性粒細胞和內(nèi)皮細胞，觀察中性粒細胞與人臍靜脈內(nèi)皮細胞的粘附變化。分別采用免疫細胞化學(xué)、Westem Blot以及RT一PC

3、R的方法觀察NMDA受體一型亞基(NMDA receptor l，NMDARl)在中性粒細胞和內(nèi)皮細胞的表達。以流式細胞術(shù)觀察NMDA處理后中性粒細胞粘附分子CDllb／CDl8的表達變化。 結(jié)果：1．RT—PCR證實，在內(nèi)皮細胞和中性粒細胞中均存在NMDA 受體NMDARl亞基的mRNA表達。采用Westem Blot證明內(nèi)皮細胞和中性粒細胞均存在NMDARl受體亞基的蛋白表達，但中性粒細胞的蛋白表達強于內(nèi)皮細胞。進一步采用免

4、疫細胞化學(xué)的方法研究也證實，在中性粒細胞及內(nèi)皮細胞表面有陽性染色。 2．用不同濃度的NMDA處理中性粒細胞4小時后，將中性粒細胞與臍靜脈內(nèi)皮細胞ECV304共培養(yǎng)2小時，與正常對照組比較，中性粒細胞與內(nèi)皮細胞的粘附變化率在較低劑量(10<'-9>～10<'-6>mol／L)時隨NMDA濃度而升高，而劑量高于10<'-6>mol／L時則隨NMDA濃度的升高而降低，在10<'-6>mol／L濃度達到最高粘附變化率(p<0.01)。較

5、高劑量時測定中性粒細胞培養(yǎng)上清LDH活性顯示細胞損傷情況隨NMDA濃度升高而升高，當NMDA濃度>l0<'-5>mol／L時，中性粒細胞培養(yǎng)上清LDH活性與正常對照組比較有顯著增高(p<0.01)。NMDA處理內(nèi)皮細胞后對中性粒細胞與內(nèi)皮細胞的粘附變化率無顯著性影響 (P>0.05)3．采用流式細胞術(shù)測定顯示，NMDA處理中性粒細胞4小時后細胞表面粘附分子CDllb平均熒光強度高于對照組(p<0.05)。 結(jié)論：1．中性粒細胞

6、及ECV304內(nèi)皮細胞有NMDA受體NMDAR1的表達，但中性粒細胞的NMDAR1蛋白表達強于ECV304內(nèi)皮細胞。 2．中性粒細胞膜上的NMDA受體激活可以促進中性粒細胞粘附于ECV304內(nèi)皮細胞表面。內(nèi)皮細胞上的NMDA受體激活對中性粒細胞與ECV304內(nèi)皮細胞間相互粘附無明顯影響。 3．NMDA受體激活可以上調(diào)中性粒細胞表面粘附分子CDllb表達，介導(dǎo)中性粒細胞與ECV304內(nèi)皮細胞間粘附。 4．高濃度NM