新生大鼠缺氧缺血性腦損傷ZO-1和occludin的動(dòng)態(tài)變化研究.pdf

1、目的：
　　 本實(shí)驗(yàn)制備新生大鼠缺氧缺血性腦損傷(HIBD)模型,觀察新生大鼠HIBD后腦組織緊密連接蛋白ZO-1 mRNA,occludin mRNA表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化,進(jìn)一步探討缺氧缺血后新生大鼠腦水腫的發(fā)生機(jī)制和緊密連接蛋白ZO-1,occludin在缺氧缺血性腦損傷中的保護(hù)作用,為臨床新生兒缺氧缺血性腦病(HIE)的早期診斷和早期干預(yù)提供新的途徑。
　　 方法：
　　 1.HIBD模型的制備:將48只新生7日

2、齡SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)對(duì)照組、HIBD3 h、6h、24h、48 h、72h組,每組大鼠8只,行頸部正中切口切開(kāi)頸部皮膚,分離結(jié)扎左側(cè)頸總動(dòng)脈后,給予低氧(8％02,92％N2)處理2小時(shí),制成HIBD模型。假手術(shù)組只予分離但不結(jié)扎左側(cè)頸總動(dòng)脈,于手術(shù)恢復(fù)后24 h處死。同時(shí)觀察缺氧時(shí)動(dòng)物行為變化。
　　 2.腦大體形態(tài)肉眼觀察:在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處死時(shí)注意觀察每只新生大鼠腦組織的大體形態(tài)變化。
　　 3.HE染色:每組兩只大

3、鼠結(jié)扎側(cè)腦組織進(jìn)行HE染色,光鏡下觀察腦組織的病理形態(tài)變化。
　　 4.ZO-1 mRNA,occludin mRNA表達(dá)的檢測(cè):每組6只新生大鼠結(jié)扎側(cè)腦組織采用Real-time Q-PCR方法測(cè)定ZO-1 mRNA,occludin mRNA的表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化。
　　 結(jié)果：
　　 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型行為表現(xiàn):術(shù)前48只新生大鼠行為能力正常,均能正常進(jìn)食,假手術(shù)對(duì)照組未見(jiàn)行為異常表現(xiàn)；HIBD組經(jīng)歷缺氧時(shí)出現(xiàn)嚴(yán)重

4、的行為異常。
　　 2.腦大體形態(tài)肉眼觀:假手術(shù)對(duì)照組新生大鼠大腦半球左右對(duì)稱,未見(jiàn)任何病理變化,24 h時(shí)腦組織蒼白、水腫明顯,體積稍大于對(duì)側(cè),72 h時(shí)可看到結(jié)扎側(cè)半球局部出現(xiàn)液化壞死灶,甚至腦組織完全液化與硬腦膜粘連。
　　 3.組織學(xué)檢查結(jié)果:對(duì)照組未見(jiàn)變化,HIBD后神經(jīng)元變性,壞死,丟失,同時(shí)膠質(zhì)細(xì)胞增生。
　　 4.ZO-1 mRNA,occludin mRNA在腦組織中的表達(dá)水平變化:
　　

5、 ①ZO-1 mRNA的動(dòng)態(tài)表達(dá)結(jié)果對(duì)照組大鼠ZO-1 mRNA表達(dá)水平較高,HIBD各組大鼠在經(jīng)歷缺氧缺血后,3 h組表達(dá)開(kāi)始下降,24 h組降至最低,此后逐漸上升,但在72 h組仍維持在較低水平。各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均比對(duì)照組低,與對(duì)照組比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),24 h組與HIBD其他組比較也均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 ②occludin mRNA的動(dòng)態(tài)表達(dá)結(jié)果對(duì)照組大鼠occludin mRNA表達(dá)水平較高,H

6、IBD組大鼠在經(jīng)歷缺氧缺血后,3 h組表達(dá)開(kāi)始下降,24 h組降至最低,此后逐漸上升,但在72 h組仍維持在較低的水平。各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均比對(duì)照組低,與對(duì)照組比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),24 h組與HIBD其他組比較也均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.新生大鼠HIBD模型制作成功。
　　 2.新生大鼠腦缺氧缺血后發(fā)生腦水腫。
　　 3.新生大鼠缺氧缺血性腦損傷后神經(jīng)元變性壞死。