新生大鼠缺氧缺血性腦損傷導(dǎo)致腦膽固醇穩(wěn)態(tài)破壞的研究.pdf

1、目的：研究新生大鼠缺氧缺血性腦損傷后腦膽固醇穩(wěn)態(tài)變化情況及其對腦白質(zhì)發(fā)育的影響，并初步探討引起該變化的可能機(jī)制。 發(fā)生于圍產(chǎn)期的缺氧缺血性腦病 (Hypoxic-ischemic Encephalopathy，HIE)可造成新生兒神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育障礙，導(dǎo)致患兒死亡，幸存者也多留有嚴(yán)重的后遺癥如腦性癱瘓、認(rèn)知與學(xué)習(xí)障礙以及癲癇等，至今尚無有效的治療方法。因此，對該病的發(fā)病機(jī)制進(jìn)行深入研究以尋求更加安全有效的治療方法意義重大。

2、膽固醇是一類多面性分子，是細(xì)胞膜及膜性細(xì)胞器的重要組成成分，在腦中含量豐富。近年來，膽固醇在腦發(fā)育中的作用越來越受到關(guān)注，軸突的生長、樹突的發(fā)生、神經(jīng)元的存活、星形膠質(zhì)細(xì)胞的增生、物質(zhì)的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)以及發(fā)育中的一些信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程都離不開膽固醇的參與。更重要的是，膽固醇是形成髓鞘不可或缺的物質(zhì)，同時(shí)也是腦白質(zhì)發(fā)育的限速物質(zhì)，在腦尤其是發(fā)育期腦組織中，膽固醇穩(wěn)態(tài)的維持至關(guān)重要。 研究發(fā)現(xiàn)，大鼠生后前3周，腦膽固醇濃度迅速升高，這時(shí)正是髓鞘

3、形成的關(guān)鍵時(shí)期，而缺氧缺血性腦損傷也發(fā)生于此時(shí)，鑒于膽固醇在髓鞘發(fā)育中的重要作用，本實(shí)驗(yàn)利用新生大鼠缺氧缺血性腦損傷模型，觀察損傷后腦膽固醇穩(wěn)態(tài)變化與腦自質(zhì)發(fā)育情況。由于在一些重癥疾病中促炎性細(xì)胞因子的大量釋放可引起低膽固醇血癥，本實(shí)驗(yàn)也檢測了損傷后腦TNF-α與 IL-6水平，以期為HIE的發(fā)病機(jī)制及治療方法的研究提供新的思路。 方法：選用7日齡Sprague-Dawley(SD)大鼠，隨機(jī)分為正常對照組、假手術(shù)組與模型組，將

4、大鼠左側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎、剪斷，并缺氧(氧濃度8％)兩小時(shí)以建立新生大鼠缺氧缺血模型，測量生后8、9、10、14及21d動(dòng)物腦重及體重增長情況；以高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)檢測上述時(shí)間點(diǎn)腦膽固醇濃度變化情況；在生后10d與14d以髓磷脂堿性蛋白(Myelin BasicProtein，MBP)的免疫組織化學(xué)染色評估腦白質(zhì)發(fā)育情況；生后21 d以電鏡觀察外囊髓鞘的超

5、微結(jié)構(gòu)；并在術(shù)后12h以酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA)檢測腦TNF-α與IL-6表達(dá)情況結(jié)果：生后21 d，模型組動(dòng)物體重明顯低于正常對照組(P<0.001)，模型組動(dòng)物腦重則在生后14d和21 d時(shí)明顯降低(P<0.001)；在損傷早期，即生后8d、9d及10d，腦膽固醇濃度顯著降低(P<0.05)：MBP免疫組織化學(xué)染色顯示：模型組的陽性染色明顯弱于正常對照組(P<

6、0.01)，以外囊、內(nèi)囊、基底節(jié)及丘腦等處明顯；電鏡檢測可見模型組外囊處髓鞘數(shù)量減少、厚度降低，并有纏繞松散的現(xiàn)象出現(xiàn)；術(shù)后12h，模型組腦TNF-α與IL-6表達(dá)顯著增加(P<0.05)。 結(jié)論：一、新生大鼠缺氧缺血性腦損傷后體重與腦重增長緩慢，且腦重增長的緩慢程度高于體重。二、新生大鼠缺氧缺血性腦損傷后，腦膽固醇穩(wěn)態(tài)被破壞，在損傷早期，腦膽固醇濃度明顯降低。三、不同白質(zhì)腦區(qū)髓鞘發(fā)育存在時(shí)間特異性。新生大鼠缺氧缺血性腦損傷后，