Fas和FasL在新生大鼠缺氧缺血性腦損傷后的表達研究.pdf

1、目的：利用新生大鼠缺氧缺血性腦損傷(hypoxic-ischemicbraindamage，HIBD)動物模型，觀察缺氧缺血性腦損傷后新生大鼠不同時間點腦神經(jīng)元細胞形態(tài)變化、Fas和FasL蛋白的合成，并探討二者間的關系，為臨床新生兒缺氧缺血性腦病的預防和治療提供實驗和理論依據(jù)。
　　 方法：1.制備新生大鼠缺氧缺血性腦損傷(hypoxic-ischemicbraindamage，HIBD)動物模型。2.行為能力的檢查：分別于術

2、前和術后及缺氧時觀察每只新生大鼠的行為變化。3.將7日齡Wistar大鼠128只，雌雄不限，體重11～19g，隨機分為：正常對照組（16只）：不做任何處理；假手術組（16只）：游離左側頸總動脈后不結扎，直接縫合皮下組織及皮膚，不進行缺氧處理；缺氧缺血組(HIBD)（96只）：采用阻斷左側頸總動脈后置于低氧環(huán)境中2小時，建立缺氧缺血性腦損傷動物模型并對其行為進行觀察。HIBD組于6h、12h、24h、48h、72h、7d各處死16只，灌注

3、固定后取腦組織常規(guī)石蠟包埋、切片，HE染色觀察神經(jīng)元細胞形態(tài)變化，免疫組織化學染色法（SP法）檢測三組大鼠不同時間點Fas及FasL在大腦皮層的神經(jīng)元細胞中的表達。采用BI-2000醫(yī)學圖像分析系統(tǒng)進行圖像采集與分析，每張切片隨機選取5個高倍視野(×400)，根據(jù)染色強度測定陽性信號灰度。用SPSS13.0統(tǒng)計分析軟件進行數(shù)據(jù)分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結果：1.神經(jīng)系統(tǒng)功能改變：正常對照組及假手術組無明顯神

4、經(jīng)系統(tǒng)異常改變，HIBD組在缺氧1～5分鐘后均出現(xiàn)激惹、翻身不能、平衡異常、夾尾尖叫甚至抽搐等異常行為改變。2.HE染色：缺氧缺血后6h左側腦神經(jīng)元細胞水中及少量局灶性壞死，缺氧缺血后72h左側腦皮質的神經(jīng)元細胞中可見界限清楚的壞死灶。3.Fas的表達變化：正常對照組及假手術組偶可見Fas在大腦皮質神經(jīng)元細胞胞漿表達；HIBD組可見較多的大腦皮質神經(jīng)元細胞胞漿Fas表達陽性細胞，6h開始升高，24h明顯增多，于72h達高峰，圖像灰度分析

5、示灰度值組間差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。4.FasL的表達變化：正常對照組和假手術組FasL在腦神經(jīng)元細胞胞漿少量表達，細胞核無明顯表達；HIBD組FasL表達在腦神經(jīng)元細胞胞漿6h后開始升高，48h～72h達高峰，至7天仍可見免疫反應陽性細胞，圖像灰度分析示灰度值組間差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。5.Fas和FasL表達水平的相關性分析，結果示缺氧缺血性腦損傷后Fas蛋白表達水平與FasL蛋白表達水平呈正相關系，相關系數(shù)

6、（r=0.8818）。
　　 結論：1.在HIBD后6h，F(xiàn)as的合成在腦神經(jīng)元細胞胞漿開始逐漸增多，于72h達高峰，隨著其增多FasL蛋白表達也逐漸增多于72h達高峰，F(xiàn)as的蛋白表達先于FasL，且通過直線相關分析兩者的表達呈正相關關系，2.初步推斷Fas蛋白的活化可以上調FasL蛋白的表達。3.Fas/FasL與腦細胞凋亡有直接關系，是HIBD的發(fā)病機制之一。4.另外在實驗結果中，我們觀察到腦損傷后隨著時間的推移，顯示Fa