中國(guó)林蛙蛙頭提取物中抗凝血活性物質(zhì)的研究.pdf

1、中國(guó)林蛙(RanaChensinensis)，俗稱田雞，蛤士蟆，屬兩棲綱，無尾目蛙科，是我國(guó)特有的經(jīng)濟(jì)價(jià)值很高的藥用兩棲動(dòng)物。它在我國(guó)許多地區(qū)都能生存，但主要分布在東北三省。中國(guó)林蛙渾身都是寶，具有較高的藥用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，目前國(guó)內(nèi)關(guān)于中國(guó)林蛙的利用多為雌蛙的制藥及蛙肉的食用等傳統(tǒng)的研究范疇，有關(guān)中國(guó)林蛙深加工的報(bào)道很少。本文旨是從林蛙頭中分離出具有抗凝血活性的提取物，為大幅度提高林蛙產(chǎn)品的附加值，實(shí)現(xiàn)其綜合利用開辟一條新的途徑。

2、 首先，實(shí)驗(yàn)以中國(guó)林蛙的蛙頭為原料，經(jīng)過剪切，勻漿，堿解，去蛋白，干燥等處理后得到一種有抗凝血活性的提取物，并以L9(34)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化選出抗凝血提取物的最佳提取工藝是勻漿時(shí)加入的生理鹽水的量為林蛙頭體積的2倍，堿解時(shí)的時(shí)間為8h，堿解時(shí)加入堿液的體積為原液的5倍，堿解時(shí)的溫度為30℃。并在此條件下進(jìn)行了中試實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明此放大中試試驗(yàn)是完全可行的，可以用于工業(yè)化生產(chǎn)。 其次，對(duì)林蛙頭提取物進(jìn)行了抗凝血活性研究，結(jié)果顯示林

3、蛙頭提取物在體外能延長(zhǎng)凝血時(shí)間，復(fù)鈣凝血時(shí)間，凝血酶原時(shí)間，凝血酶時(shí)間，抑制凝血酶活性，并和劑量呈依賴關(guān)系。但沒有水解纖維蛋白的活性和對(duì)纖溶酶原激活活性。在體內(nèi)能延長(zhǎng)凝血時(shí)間和出血時(shí)間，但和劑量沒有依賴關(guān)系。并對(duì)林蛙頭提取物進(jìn)行了抗凝血性能的評(píng)價(jià)，大概有肝素活性的二十分之一，同時(shí)用試管血液凝固方法測(cè)定了其抗凝血活性的效價(jià)為5.2U。 然后，對(duì)林蛙頭提取物進(jìn)行了理化性質(zhì)分析。結(jié)果表明，林蛙頭提取物易溶解于水中和稀酸溶液中，尤其易溶

4、于稀堿溶液中，不溶于乙醇，乙醚，乙酸乙酯，丙酮等有機(jī)溶劑。林蛙頭提取物熱穩(wěn)定性較好。在強(qiáng)酸和強(qiáng)堿下活性降低。由組分測(cè)定可知，林蛙頭提取物中含有多糖，蛋白，氨基酸，氨基己糖，半乳糖醛酸，硫酸根等物質(zhì)，是一種蛋白聚糖復(fù)合物。本實(shí)驗(yàn)也確定了林蛙頭提取物的抗凝的有效成分是蛋白和多糖。林蛙頭提取物可能是一種氨基多糖，是類肝素類物質(zhì)。 最后，也對(duì)林蛙頭提取物的抗凝血機(jī)制進(jìn)行了初步的探索，研究結(jié)果表明，林蛙頭提取物是通過抑制血漿中的凝血因子Ⅱ

5、，Ⅶ，Ⅹ的活性來達(dá)到抗凝血作用的。林蛙頭提取物的抗凝作用作用機(jī)制和肝素相似，推測(cè)林蛙頭提取物是類肝素物質(zhì)。 在以上研究結(jié)果的基礎(chǔ)上，本研究得出結(jié)論：林蛙頭提取物是一種蛋白聚糖，實(shí)驗(yàn)室提取工藝適合工業(yè)化大生產(chǎn)，它在體內(nèi)體外均有抗凝血作用，但沒有溶栓作用?？鼓鼓r(jià)為5.2，在凝血過程中能抑制凝血因子Ⅱ，Ⅶ，Ⅹ的活性，作用機(jī)制和肝素相似，推測(cè)是一種類肝素類物質(zhì)。 本實(shí)驗(yàn)為林蛙頭進(jìn)一步開發(fā)成抗凝血的天然保健品奠定了一定的科