中國(guó)林蛙皮膚生物活性肽基因的cDNA克隆、序列分析及生物活性的測(cè)定.pdf

1、兩棲類皮膚中含有種類繁多、功能復(fù)雜的生物活性物質(zhì)，用來抵御有害環(huán)境因子的侵襲，是極具開發(fā)潛力的生物資源寶庫(kù)。中國(guó)擁有豐富的兩棲類資源，在將近300個(gè)亞種中，其中三分之二是特有種，在生物活性物質(zhì)開發(fā)方面具有極大的潛力。但是，由于兩棲類皮膚生物活性肽在其組織中含量少，分離獲得大量的天然產(chǎn)物又很困難，往往不能滿足進(jìn)一步研究的需要。利用分子生物學(xué)技術(shù)篩選活性肽就成為必然選擇，豐富了兩棲類活性物質(zhì)資源庫(kù)，并為進(jìn)一步研究活性肽表達(dá)及分離純化奠定基礎(chǔ)

2、。
　　 本論文以遼寧省撫順市新賓縣地區(qū)的中國(guó)林蛙作為試驗(yàn)材料，從中國(guó)林蛙皮膚中得到一系列活性肽基因的cDNA序列，并利用生物信息學(xué)方法初步分析活性肽基因的序列及結(jié)構(gòu)，進(jìn)而研究各活性肽的生物活性，為兩棲動(dòng)物活性肽的開發(fā)和利用奠定理論基礎(chǔ)。
　　 首先，根據(jù)GenBank中蛙類皮膚生物活性肽信號(hào)肽N-端保守序列，設(shè)計(jì)引物，采用RT-PCR和3’-RACE方法，從中國(guó)林蛙皮膚總RNA中克隆出了6條編碼不同活性肽前體的cDNA

3、序列，經(jīng)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中的Blast軟件，進(jìn)行氨基酸序列同源性比較之后，分別命名為：prcprotemporin-1CEa、preprotemporin-1CEb、preprotemporin-1CEc、preprobrevinin-1CEa、preprobrevinin-1CEb和preprochensinin-1。
　　 序列分析結(jié)果表明，6條編碼中國(guó)林蛙皮膚生物活性肽前體的cDNA序列全長(zhǎng)為289-315bp，編碼59-6

4、5個(gè)氨基酸。其前體由3部分結(jié)構(gòu)域組成：22個(gè)氨基酸殘基組成的信號(hào)肽、多個(gè)酸性氨基酸殘基組成的中間序列、高度變異的成熟肽。preprotemporin-1CEa、preprotemporin-1CEb和preprotemporin-1CEc屬于temporin-1家族抗菌肽前體，具有肽鏈短，C-端酰胺化的特點(diǎn)；preprobrevinin-1CEb和preprobrevinin-1CEa屬于brevinin-1家族抗菌肽前體，在肽鏈的C-

5、端含有RANA盒結(jié)構(gòu)，可在2個(gè)半胱氨酸殘基間形成二硫鍵，組成7肽環(huán)；preprochensinin-1在已知多種數(shù)據(jù)庫(kù)中沒有發(fā)現(xiàn)序列同源的多肽，被鑒定為新生物活性肽。
　　 人工合成temporin-1CEa、temporin-1CEb、brevinin-1CEa和chensinin-1四種中國(guó)林蛙皮膚生物活性肽，抗菌和抗癌活性檢測(cè)結(jié)果表明：它們對(duì)金黃葡萄球菌等3種革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的生長(zhǎng)具有明顯抑制作用，同時(shí)抑制乳腺癌MCF-7細(xì)