中國林蛙皮透明質(zhì)酸提取技術(shù)的研究.pdf

1、中國林蛙是一種珍貴的兩棲類藥用經(jīng)濟(jì)動(dòng)物,具有重要的保健功能,但目前市場上只有少數(shù)的林蛙油產(chǎn)品,林蛙資源沒有得到充分利用.該試驗(yàn)是以雄性林蛙及摘除蛙油的雌性林蛙的皮膚為原料,采用現(xiàn)代生物工程技術(shù)及超濾等高新技術(shù)對原料進(jìn)行加工處理,制得高純度的HA,與將林蛙作為烹飪原料相比可增值16倍以上,因此可以大大提高林蛙產(chǎn)品的附加值,使該省林蛙產(chǎn)業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益及社會(huì)效益大為提高.該文作為吉林市科技局"林蛙高效天然保濕因子的研究"課題的部分內(nèi)容,對林蛙皮

2、HA的制備工藝進(jìn)行了研究,確定了以下工藝條件.1、確定了原料預(yù)處理方法.在低溫條件下,對林蛙皮進(jìn)行高速組織破碎,通過正交試驗(yàn)確定了最佳的破碎條件:溫度為4℃,時(shí)間為3min,PH值為6.0,組織搗碎機(jī)轉(zhuǎn)速為13000r/min.2、確定了最佳提取工藝.采用復(fù)合酶法提取HA,由于作用條件溫和,制得HA的活性較高,得率較高,通過正交試驗(yàn)確定了最佳復(fù)合酶的酶解條件:溫度為45℃,時(shí)間為5h,PH為8.5,酶用量為2％.3、確定了最佳純化工藝.

3、采用鏈霉蛋白酶二次酶解、絡(luò)合沉淀和超濾結(jié)合的方法,對HA中間品進(jìn)行純化處理,制得了高純度的HA精品.鏈霉蛋白酶最佳酶解的條件是:溫度為40℃,時(shí)間為12h,PH為8,酶量為0.25％;超濾的最佳操作條件是:壓力為0.1~0.15MPa,溫度為55℃.經(jīng)該工藝分離提取出的HA,采用紅外吸收光譜和紫外光譜法對其進(jìn)行了定性測定,采用咔唑(carbazole)法和Elson-Morgan法對HA的含量及純度進(jìn)行了測定,結(jié)果表明:該試驗(yàn)提取樣品H

4、A的紅外圖譜和紫外圖譜與美國Sigma公司的標(biāo)品HA的紅外圖譜和紫外圖譜一致,其外觀呈白色粉末狀,葡糖醛酸含量44.2％,氨基葡糖含量41.5％,其摩爾比為1:1,屬化妝品級及食品級.測得HA雜蛋白含量在0.25~0.35％之間.采用Shimada法對得到的HA精品進(jìn)行了相對平均分子量的測定,結(jié)果為1.6×10<'6>.依據(jù)《食品安全性毒理學(xué)評價(jià)程序和方法》GB15193.1-1994的規(guī)定對林蛙皮HA進(jìn)行小鼠經(jīng)口急性毒性試驗(yàn)、細(xì)菌致突