東北林蛙皮膚抗菌肽抗病毒活性的初步研究.pdf

1、兩棲類皮膚抗菌肽是兩棲類在進化過程中獲得的一道抵御外源微生物入侵的屏障，其種類眾多、功能多樣，具有抗細菌、抗真菌、抗腫瘤等方面的性質(zhì)和機制，特別是近幾年來，研究發(fā)現(xiàn)兩棲類抗菌肽對皰疹病毒、艾滋病毒等有抑制作用，且在抑殺病毒的同時對宿主細胞無傷害。在當今多種病毒性疾病的傳播給全球經(jīng)濟造成了巨大損失，各種病毒的迅速變異的情況下，以及抗病毒藥物療效降低和較嚴重的毒副作用等，尋找安全、有效的抗病毒藥物成為全球關(guān)注的焦點，而兩棲類皮膚活性肽因其獨

2、特的抗微生物特點，有望成為開發(fā)新型抗病毒藥物的主要途徑之一。 本實驗以東北林蛙(Ranadybowskii)作為兩棲類的代表物種，從蛙皮膚分泌物中提取并純化抗菌肽，通過以SAH水解酶活性抑制為評價指標的體外廣譜抗病毒初篩模型檢測皮膚抗菌肽的抗病毒活性，并以H9N2亞型禽流感病毒為試驗對象，進一步檢測蛙皮膚抗菌肽對有包膜病毒病毒的抑制作用。實驗中的抗菌肽全部由本實驗室提取。 結(jié)果表明：(1)從鮮牛肝臟中提取純化的SAH水解

3、酶，比活力為1.23U/mg，在1分鐘內(nèi)SAH水解酶催化30.7％的腺苷(Hcy)與高半胱氨酸(Ado)合成為S-腺苷-L高半胱氨酸(SAH)；(2)向SAH水解酶反應體系加入皮膚抗菌肽后，1分鐘內(nèi)有44.7％的Hcy與Ado合成為SAH，說明東北林蛙皮膚活性肽對SAH水解酶有抑制作用，東北林蛙皮膚中含有廣譜抗病毒作用的活性成分；(3)東北林蛙皮膚抗菌肽對H9N2病毒的殺滅作用較明顯，與攻毒組比較，殺滅組、治療組和預防組血凝效價差異極顯

4、著(P＜0.01)，殺滅組血凝效價(Log2)從(10±0.82)降低至(3±0.82)，預防組血凝效價(Log2)降低至(5.5±0.50)，治療組血凝效價(Log2)降低至(5.3±0.58)。與治療組和預防組相比較，殺滅組對H9N2病毒的抑制作用更明顯。 結(jié)論：(1)本研究建立了SAH水解酶活性抑制的體外廣譜抗病毒初篩模型，采用比色法從合成方向檢測了SAH水解酶活性，該檢測方法是本實驗室首創(chuàng)，具有重復性好，操作簡單，實驗周