白藜蘆醇對(duì)成年期追趕生長(zhǎng)大鼠脂肪組織脂質(zhì)生成和儲(chǔ)存能力的影響及機(jī)制研究.pdf

1、第一部分成年期追趕生長(zhǎng)大鼠模型的建立及一般生物學(xué)特征觀察
　　目的:建立成年期追趕生長(zhǎng)大鼠模型并觀察其一般生物學(xué)特征。
　　方法:采用體重因素隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì),按體重區(qū)組將6周齡雄性SD大鼠24只隨機(jī)分為4組(共2個(gè)時(shí)間點(diǎn)),4周時(shí)間點(diǎn)2組:熱卡限制4周組(R4),正常飲食4周組(NC4);12周時(shí)間點(diǎn)2組:正常飲食追趕生長(zhǎng)8周組(RN8)和持續(xù)正常飲食12周組(NC12)。通過(guò)先熱卡限制后恢復(fù)飲食的方法建立成年期追趕生長(zhǎng)大鼠模

2、型。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中每天記錄實(shí)驗(yàn)大鼠進(jìn)食量及體重變化,實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)觀察實(shí)驗(yàn)大鼠熱卡攝入量、體重和雙能X線吸收測(cè)量法DEXA(Dual Energy X-ray Absorptiometry)檢測(cè)不同部位的脂肪含量。高胰島素-正糖鉗夾實(shí)驗(yàn)評(píng)估追趕生長(zhǎng)大鼠系統(tǒng)胰島素敏感性及血糖、血清胰島素水平檢測(cè)。
　　結(jié)果:
　　1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)際能量攝入在限食期間約為NC組的60％,恢復(fù)飲食后基本達(dá)到NC組水平。
　　2、RN組在熱卡限制期生長(zhǎng)

3、受抑,體重明顯下降?；謴?fù)飲食后,體重增加迅速,但實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)仍未達(dá)NC組水平。
　　3、DEXA檢測(cè)結(jié)果示限食時(shí)軀干組織脂肪含量及軀干脂肪占全身脂肪比例較正常對(duì)照組均下降,開(kāi)放飲食后,RN8組全身、軀干脂肪含量及軀干脂肪比例均顯著高于NC組。
　　4、高胰島素-正葡萄糖鉗夾實(shí)驗(yàn)顯示RN組存在嚴(yán)重的系統(tǒng)胰島素抵抗。R4組血糖和胰島素水平較NC4組無(wú)明顯變化,RN8組血糖水平較NC12組變化不明顯,但胰島素水平顯著升高。
　

4、　結(jié)論:通過(guò)熱卡限制后恢復(fù)飲食方法建立的成年期追趕生長(zhǎng)大鼠模型表現(xiàn)為熱卡限制期體重生長(zhǎng)抑制,恢復(fù)飲食后體重增長(zhǎng)迅速和明顯的體脂含量及內(nèi)臟脂肪比例升高,且存在顯著地系統(tǒng)胰島素抵抗。與人群中發(fā)生的追趕生長(zhǎng)時(shí)所觀察到的變化類似,可作為一種較為理想的研究追趕生長(zhǎng)的模型。
　　第二部分成年期追趕生長(zhǎng)大鼠脂肪組織脂質(zhì)生成與儲(chǔ)存能力的改變與胰島素抵抗形成的關(guān)系
　　目的:探討成年期追趕生長(zhǎng)脂肪組織脂質(zhì)生成與儲(chǔ)存能力的改變和胰島素抵抗之間的

5、可能機(jī)制。
　　方法:采用體重因素隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì),按體重區(qū)組將6周齡雄性SD大鼠隨機(jī)分為8組其中4組(即追趕生長(zhǎng)組群RN)為熱卡限制組(R4)和追趕生長(zhǎng)2、4、8周組(熱卡限制后開(kāi)放正常飲食RN2、RN4、RN8);另外4組為與之年齡匹配的正常飲食對(duì)照組(即NC組群,分別為NC4、NC6、NC8、NC12)。檢測(cè)附睪和皮下脂肪組織PPAR-γ、FSP27的表達(dá)水平,檢測(cè)兩種脂肪組織在熱卡限制期末及追趕生長(zhǎng)8周結(jié)束時(shí)(R4、RN8)兩

6、個(gè)時(shí)間點(diǎn)的高胰島素-正糖鉗夾實(shí)驗(yàn)過(guò)程中2-脫氧-D葡萄糖攝取、血清甘油三酯、游離脂肪酸、脂聯(lián)素及腫瘤壞死因子-α水平。
　　結(jié)果:
　　1、與NC4組相比,R4組附睪脂肪PPAR-γ的表達(dá)顯著增加,而FSP27的表達(dá)明顯下降;R4組皮下脂肪組織PPAR-γ的表達(dá)亦顯著增加,但FSP27無(wú)明顯變化。
　　2、與NC4組相比,R4組附睪脂肪和皮下脂肪組織2-脫氧-D葡萄糖攝取率輕度增加,但均未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3

7、、R4組血清游離脂肪酸、脂聯(lián)素水平較NC4組明顯升高,甘油三酯、腫瘤壞死因子-α變化不顯著。
　　4、附睪脂肪組織的PPAR-γ的表達(dá)水平在RN2、RN4、RN8組均明顯增加,FSP27的mRNA表達(dá)水平在RN2組低于NC6組,在RN4組與NC8組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,在RN8組明顯高于NC12組。
　　5、皮下脂肪組織的PPAR-γ和FSP27表達(dá)水平在RN2、RN4、RN8組均無(wú)明顯差異。
　　6、RN8組附睪脂肪組織2-

8、脫氧-D葡萄糖攝取較NC12組顯著增加,而皮下脂肪組織變化不明顯。
　　7、RN8組血清游離脂肪酸、甘油三酯、腫瘤壞死因子-α水平均顯著升高,而脂聯(lián)素水平則明顯降低。
　　結(jié)論:限食階段內(nèi)臟脂肪組織脂質(zhì)生成和儲(chǔ)存能力改變的不一致導(dǎo)致恢復(fù)飲食后脂質(zhì)儲(chǔ)存能力相對(duì)不足,加之生脂原料增加,使得過(guò)多的脂質(zhì)不能有效的儲(chǔ)存,脂質(zhì)外溢,炎癥因子釋放增加,最終導(dǎo)致系統(tǒng)胰島素抵抗的形成。皮下脂肪組織在該過(guò)程中變化不顯著。因此,內(nèi)臟脂肪的脂質(zhì)生成

9、和儲(chǔ)存能力的失衡可能是成年期追趕生長(zhǎng)胰島素抵抗形成的重要原因。
　　第三部分白藜蘆醇對(duì)成年期追趕生長(zhǎng)大鼠脂肪組織脂質(zhì)生成和儲(chǔ)存能力的影響
　　目的:評(píng)估白藜蘆醇在成年期追趕生長(zhǎng)大鼠模型中對(duì)脂肪組織脂質(zhì)生成和儲(chǔ)存能力的影響。
　　方法:分組方法同第一部分,在4周和12周時(shí)間點(diǎn)各增加1組分別為R4+白藜蘆醇、RN8+白藜蘆醇(R4E、RN8E)組,即選取熱卡限制結(jié)束(R4)及恢復(fù)飲食追趕生長(zhǎng)結(jié)束(RN8)兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)作為觀察

10、白藜蘆醇干預(yù)效果的研究。每天進(jìn)行一定劑量白藜蘆醇灌胃治療,其余4組(NC4、R4、NC12和RN8)均進(jìn)行相同劑量生理鹽水灌胃治療。記錄白藜蘆醇干預(yù)組的體重,DEXA檢測(cè)干預(yù)組體脂含量,高胰島素-正糖鉗夾實(shí)驗(yàn)評(píng)估白藜蘆醇對(duì)追趕生長(zhǎng)大鼠(R4E和RN8E組)系統(tǒng)胰島素敏感性的影響;檢測(cè)4周組和8周組干預(yù)前后附睪和皮下脂肪組織SIRT-1的表達(dá)水平及活性;檢測(cè)干預(yù)后附睪和皮下脂肪組織PPAR-γ和FSP27的表達(dá)水平、高胰島素-正糖鉗夾實(shí)驗(yàn)

11、過(guò)程中2-脫氧-D葡萄糖攝取率、脂肪細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變;檢測(cè)12周組附睪脂肪組織 AKT及磷酸化 AKT的表達(dá);檢測(cè)干預(yù)后血清甘油三酯、游離脂肪酸、脂聯(lián)素及腫瘤壞死因子-α水平。
　　結(jié)果:
　　1、R4E和RN8E組全身組織脂肪含量、軀干組織脂肪含量、軀干脂肪占全身脂肪比例,均較干預(yù)前明顯下降,達(dá)到甚至低于NC組。體重較干預(yù)前僅輕度下降,與RN組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2、白藜蘆醇對(duì)R4E組系統(tǒng)胰島素敏感性、空腹血糖及

12、空腹胰島素水平無(wú)明顯影響;RN8E組胰島素敏感性和空腹胰島素顯著改善,基本恢復(fù)至正常水平,但對(duì)血糖水平影響不明顯。
　　3、4周組中SIRT-1的表達(dá)和活性與NC4組相比,兩種脂肪組織在R4組均明顯升高;在12周組中與NC12組相比,兩種脂肪組織在RN8組均明顯降低;白藜蘆醇干預(yù)后,兩種組織在R4E、RN8E組SIRT-1的表達(dá)和活性超過(guò)或達(dá)到正常對(duì)照組。
　　4、經(jīng)白藜蘆醇干預(yù)后,附睪脂肪組織R4E、RN8E組FSP27的

13、mRNA表達(dá)水平較干預(yù)前顯著增加,超過(guò)NC組;PPAR-γ的表達(dá)明顯下降,接近或低于NC組;2-脫氧-D葡萄糖攝取顯著增加,高于NC組;RN8脂肪細(xì)胞組形狀不規(guī)則,直徑變大,胞膜不完整;RN8E組脂肪細(xì)胞形態(tài)學(xué)趨于正常。
　　5、與NC12組相比,RN8組大鼠附睪脂肪Ser473 PKB磷酸化程度無(wú)顯著變化,Thr308 PKB磷酸化程度明顯升高;白藜蘆醇干預(yù)后,Ser473和Thr308 PKB磷酸化程度均明顯高于NC12及RN

14、8組。
　　6、經(jīng)白藜蘆醇干預(yù)后,皮下脂肪組織R4E、RN8E組PPAR-γ的表達(dá)水平較干預(yù)前顯著降低,接近或低于NC組;2-脫氧-D葡萄糖攝取顯著增加,高于NC組;脂肪細(xì)胞在RN8、RN8E組形態(tài)學(xué)變化不明顯。
　　7、R4E組和RN8E組血清游離脂肪酸、甘油三酯、腫瘤壞死因子-α均較干預(yù)前有所下降,在RN8E組下降趨勢(shì)更為明顯;脂聯(lián)素水平則較干預(yù)前顯著升高,恢復(fù)至NC組水平。
　　結(jié)論:白藜蘆醇可抑制追趕生長(zhǎng)過(guò)程中