不同飲食狀態(tài)下白藜蘆醇對(duì)斑馬魚(yú)脂代謝的影響及機(jī)制研究.pdf

1、背景:隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，人們生活水平的提高和膳食結(jié)構(gòu)的改變，肥胖、2型糖尿病、心血管疾病及慢性非傳染性代謝綜合征(Metabolic syndrome，MS)疾病發(fā)生率逐年遞增，在世界范圍內(nèi)呈流行趨勢(shì)。過(guò)度攝入高脂肪、高碳水化物、高蛋白為代表的膳食是肥胖、高血壓、高血糖和血脂水平異常的根本原因之一。如何在這些慢性漸進(jìn)性疾病癥狀發(fā)生之前，預(yù)防和阻止功能損害，一直是預(yù)防醫(yī)學(xué)的迫切任務(wù)。以白藜蘆醇(Resveratrol，RSV)和茶多酚等

2、為代表的植物化學(xué)物被認(rèn)為在預(yù)防MS及心血管疾病方面頗具前景，但由于關(guān)鍵性預(yù)防作用機(jī)制尚不明確，其實(shí)際應(yīng)用受到嚴(yán)重制約。
　　目的:探討RSV對(duì)限食和過(guò)度喂食斑馬魚(yú)脂代謝的影響及其機(jī)制，為肥胖以及其他代謝綜合征疾病的飲食預(yù)防和治療提供理論基礎(chǔ)。
　　方法:將1140條成年健康雄性斑馬魚(yú)隨機(jī)分為6組，即為正常喂飼組(Con)，正常喂飼+RSV組(Con+RSV)，限制喂飼組(CR)，限制喂飼+RSV組(CR+RSV)，過(guò)度喂飼組

3、(DIO)，過(guò)度喂飼+RSV組(DIO+RSV)。正常喂飼量為8mg蟲(chóng)卵/魚(yú)/天，每天9:00喂飼1次;限制喂飼量為5mg蟲(chóng)卵/魚(yú)/天，每天9:00喂飼1次;過(guò)量喂飼量為60mg蟲(chóng)卵/魚(yú)/天，分每天9:00、12:00、17:003次喂飼，每次飼喂20mg蟲(chóng)卵/魚(yú)/天。RSV干預(yù)劑量為20μM，每天22:00～次日9:00將斑馬魚(yú)置于新配制的RSV水溶液中飼養(yǎng)干預(yù)11h，持續(xù)8w。8周后，測(cè)定斑馬魚(yú)的體長(zhǎng)、體重、空腹血糖濃度、血漿總膽固

4、醇（Total cholesterol，TC）濃度、血漿甘油三酯(Triglyceride，TG)濃度。用HE染色觀察斑馬魚(yú)肝臟組織學(xué)形態(tài)變化。利用western blotting法檢測(cè)魚(yú)體中磷酸化的腺苷活化蛋白激酶(pAMPK)、組蛋白去乙?；?(Sirt1)、過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活因子1α(PGC1α)、過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體-γ（PPARγ）、窖蛋白-1(Cav-1)和微管相關(guān)蛋白1輕鏈3(LC3)蛋白表達(dá)。用免

5、疫共沉淀和蛋白免疫印跡法檢測(cè)Cav-1與LC3-Ⅱ的相互作用。
　　結(jié)果:(1)過(guò)度喂食（60mg/fish/天）8周后，斑馬魚(yú)體長(zhǎng)、體重和肥滿度均明顯增加，呈現(xiàn)肥胖狀態(tài);同時(shí)，空腹血糖和血漿TC濃度增高;肝臟組織脂肪浸潤(rùn)和肝索結(jié)構(gòu)紊亂。限食（5mg/fish/天）使斑馬魚(yú)體長(zhǎng)、體重和肥滿度均明顯降低;同時(shí)，使血漿TG水平降低，但對(duì)空腹血糖濃度和血漿TC水平的影響無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2) RSV干預(yù)對(duì)斑馬魚(yú)體長(zhǎng)、體重、空腹血糖的影響無(wú)

6、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;使正常喂食組斑馬魚(yú)過(guò)度喂食的肥滿度減少4％;除過(guò)度喂食組外，正常喂食組和限食組斑馬魚(yú)的血漿TG降低;過(guò)度喂食組血漿TC降低。(3)限食組斑馬魚(yú)魚(yú)體pAMPKα蛋白表達(dá)水平明顯高于正常喂食組和過(guò)度喂食組;RSV干預(yù)下調(diào)了pAMPKα蛋白表達(dá)水平。正常喂食和過(guò)度喂食情況下，RSV干預(yù)對(duì)pAMPKα蛋白表達(dá)水平的影響無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(4)限食使斑馬魚(yú)Sirt1蛋白表達(dá)水平升高，而過(guò)度喂食對(duì)Sirt1蛋白表達(dá)水平的影響無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;無(wú)

7、論是在限食還是過(guò)度喂食情況下，RSV干預(yù)均使Sirt1蛋白表達(dá)水平顯著升高。(5)限食使斑馬魚(yú)魚(yú)體PGC1α蛋白表達(dá)水平升高，而過(guò)度喂食對(duì)PGC1α蛋白表達(dá)水平的影響無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;RSV對(duì)PGC1α蛋白表達(dá)水平的影響無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(6)過(guò)度喂食使斑馬魚(yú)魚(yú)體PPARγ蛋白水平表達(dá)升高;限食對(duì)PPARγ蛋白表達(dá)水平的影響無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義; RSV干預(yù)使過(guò)度喂食組PPARγ蛋白表達(dá)水平降低。(7)限食組和過(guò)度喂食組斑馬魚(yú)魚(yú)體Cav-1蛋白表達(dá)水平

8、均明顯高于正常喂食組;RSV干預(yù)使過(guò)度喂食組斑馬魚(yú)Cav-1蛋白表達(dá)水平降低，但對(duì)正常喂食組和限食組斑馬魚(yú)Cav-1蛋白表達(dá)水平的影響無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(8)限食使斑馬魚(yú)魚(yú)體LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)水平明顯升高，而過(guò)度喂食則LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)水平降低;RSV干預(yù)使限食組LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)水平降低，而使過(guò)度喂食組LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)水平升高。(9)Cav-1與LC3-Ⅱ蛋白存在相互作用。
　　結(jié)論:(1)過(guò)度喂食（60mg/fish/天）8周，

9、引起斑馬魚(yú)肥胖;同時(shí)，空腹血糖和血漿TC增高;肝臟組織脂肪浸潤(rùn)和肝索結(jié)構(gòu)紊亂。(2)在過(guò)度喂食情況下，RSV在沒(méi)有明顯影響體長(zhǎng)、體重和血脂的情況下，可以調(diào)節(jié)飲食誘導(dǎo)肥胖斑馬魚(yú)的脂代謝，有效防止肝臟脂肪變性，起到保護(hù)肝臟的作用。(3) RSV對(duì)飲食誘導(dǎo)肥胖斑馬魚(yú)的脂代謝的調(diào)節(jié)作用可能與AMPK-Sirt1-PGC1α/PPARγ信號(hào)通路、胞膜窖/Cav-1途徑及自噬有關(guān)。(4)在限食和過(guò)度喂食情況下，RSV對(duì)斑馬魚(yú)胞膜窖/Cav-1及自噬