神經(jīng)干細(xì)胞對去血清誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡的作用.pdf

1、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病大都是因?yàn)椴煌潭鹊募?xì)胞凋亡而誘發(fā)的，如帕金森病(Parkinson'sdisease，PD)，主要是由于中腦黑質(zhì)多巴胺(Dopamine，DA)能神經(jīng)元變性壞死所致。近年來，隨著神經(jīng)科學(xué)的飛速發(fā)展，神經(jīng)干細(xì)胞(Neuralstemcells，NSCs)的移植已成為治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病最有前景的治療手段。腎上腺嗜鉻細(xì)胞(PC12cells)可分泌多巴胺，在去血清誘導(dǎo)后，其凋亡與多巴胺能神經(jīng)元的凋亡有許多共同之處，因此可以通過

2、體外PC12細(xì)胞去血清凋亡模型，研究在體的一些情況。本實(shí)驗(yàn)旨在通過研究NSCs對去血清誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞凋亡的影響，進(jìn)一步為通過NSCs移植來治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病提供相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。 實(shí)驗(yàn)采用海藻酸鈣膠珠化的NSCs與去血清培養(yǎng)的PC12細(xì)胞共培養(yǎng)，通過CCK-8細(xì)胞活性檢測法、Hoechst33342染色法、AnnexinV/PI雙標(biāo)以及PI細(xì)胞周期流式定量分析，對不同實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的活性、形態(tài)、凋亡率及細(xì)胞周期進(jìn)行比較；同時(shí)使

3、用GDNFELISA試劑盒檢測培養(yǎng)基中膠質(zhì)細(xì)胞源神經(jīng)營養(yǎng)因子(gliakalderivedneurotrophicfactor，GDNF)含量；并對膠珠的破囊工藝進(jìn)行了優(yōu)化。 結(jié)果表明：①從CCK-8細(xì)胞活性檢測分析，NSCs對去血清后PC12細(xì)胞的存活率有明顯的促進(jìn)作用。②從形態(tài)學(xué)上觀察，NSCs對去血清誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞凋亡有明顯的抑制作用，減少染色體濃縮及凋亡小體個(gè)數(shù)。③由流式細(xì)胞儀對細(xì)胞周期的分析，去血清誘導(dǎo)后，PC12

4、細(xì)胞大部分滯留在G1期，細(xì)胞向S期過渡受阻；而與NSCs共培養(yǎng)后，PC12細(xì)胞凋亡率顯著降低，減少了由去血清引起的PC12細(xì)胞阻滯現(xiàn)象，G1期細(xì)胞向S期和G2期過渡基本未受阻斷。④培養(yǎng)基中有GDNF，與由去血清誘導(dǎo)凋亡的PC12細(xì)胞共培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞分泌GDNF能力增強(qiáng)。⑤確定了最佳的成囊和破囊工藝為：1.5﹪(wt﹪)海藻酸鈉，1.5﹪(wt﹪)CaCl2，成囊反應(yīng)時(shí)間選擇為10min；檸檬酸鈉與海藻酸鈉和培養(yǎng)基混合液的體積比選擇為2