EGCG誘導(dǎo)PC12細胞凋亡及調(diào)節(jié)APP分解代謝的作用機制研究.pdf

1、目的:
　　表觀遺傳學(xué)是指在DNA序列沒有發(fā)生改變的情況下，生物體的基因的表型發(fā)生變化，同時這種基因表型的改變可以在細胞生長、增殖的過程當(dāng)中發(fā)生穩(wěn)定遺傳。表觀遺傳學(xué)主要包括DNA以及與其密切相關(guān)的蛋白，非編碼RNA等，能夠在基因表達的過程中的多個環(huán)節(jié)發(fā)揮作用，例如DNA的甲基化、組蛋白的修飾作用、染色質(zhì)的重塑、遺傳印記以及RNA的表達水平。目前，越來越多的研究表明，表觀遺傳學(xué)可能貫穿疾病發(fā)生發(fā)展的整個過程的始終，尤其是在阿爾茨海默

2、病(Alzheimer's Disease，AD)與腫瘤這兩種疾病中，也有研究表明導(dǎo)致AD發(fā)生的關(guān)鍵蛋白-淀粉樣前體蛋白(amyloid precursor protein，APP)在腫瘤中也呈現(xiàn)高表達狀態(tài)，這種基因的高表達可能與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移有一定的關(guān)系。那么是不是也就意味著通過抑制APP在兩種疾病中的高表達狀態(tài)就可以尋找出同時治療兩種疾病的突破口呢？
　　表沒食子兒茶素沒食子酸酯（epigallocatechin-3-

3、gallate，EGCG）是茶葉中含量極高的重要的一種兒茶素類化合物，目前研究數(shù)據(jù)表明EGCG具有對抗腫瘤，調(diào)理內(nèi)分泌和免疫系統(tǒng)，抗突變以及預(yù)防和治療心腦血管疾病等作用。EGCG能夠促進腫瘤細胞凋亡，減少腫瘤中HDAC1的表達，同時能夠顯著降低AD腦內(nèi)與腫瘤中APP的含量，同時激活A(yù)D腦內(nèi)Aβ的清除機制。
　　本實驗在預(yù)實驗的基礎(chǔ)上，以PC12細胞為模型著重研究EGCG誘導(dǎo)腫瘤細胞促凋亡的作用及表觀遺傳學(xué)機制，探討APP與HDAC

4、1之間的作用關(guān)系，以及EGCG對APP分解代謝途徑的調(diào)控作用;同時通過檢測人的肝癌及癌旁組織的中HDAC1和APP的表達輔助驗證HDAC1與APP的相互關(guān)系。
　　方法:
　　無胸腺的裸鼠，在注射PC12細胞成瘤后，隨機分成PBS組和EGCG組，從注射細胞到給藥完成時間為23天。通過Tunel染色及Westernblot檢測腫瘤抑制情況。體外實驗我們將EGCG作用于PC12細胞上通過MTT及流式細胞術(shù)來檢測細胞凋亡率，用We

5、sternblot來檢測APP，HDAC1， Casepase家族，Bcl-2，Bax的變化情況，分析EGCG促凋亡的機制，之后通過檢測sAPPα，sAPPβ，α-scretase，β-secretase，(Γ)-secretase，AICD，Aβ的蛋白含量變化來說明EGCG對腫瘤內(nèi)APP分解代謝途徑的影響。應(yīng)用免疫組化檢測人的肝癌及癌旁組織中APP及HDAC1的表達。
　　結(jié)果:
　　1.EGCG能夠抑制異位種植瘤的生長:

6、腹腔注射EGCG組的裸鼠腫瘤明顯小于PBS組的腫瘤，抑制率達53％(P＜0.01，n=8)。
　　2.EGCG具有促凋亡作用:通過Tunel染色，我們發(fā)現(xiàn)EGCG的促凋亡作用明顯高于PBS。同樣，EGCG作用在PC12細胞上48h，72h后，經(jīng)MTT檢測發(fā)現(xiàn)細胞存活率呈梯度下降，且72h的存活率要低于48h。
　　3.EGCG促凋亡機制通路:EGCG促進腫瘤凋亡可能與其下調(diào)Bcl-2、提高Bax的表達有關(guān)，同時我們還發(fā)現(xiàn)EG

7、CG能夠促進Casepase-3和Casepase-7的切割，降低HDAC1的表達，這也與腫瘤凋亡的機制密不可分。
　　4.EGCG對APP分解代謝途徑的影響:腫瘤組織與細胞中APP呈高表達狀態(tài)，同時EGCG能夠下調(diào)腫瘤細胞中sAPPα，sAPPβ，α-scretase，β-secretase，γ-secretase，Aβ的表達，但AICD的含量無明顯變化，且高劑量有上調(diào)趨勢。
　　5.肝癌組織中APP，HDAC1的表達高于