胃癌前病變癌變的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)-外周血微小RNA預(yù)警模型的建立及其應(yīng)用.pdf

1、胃癌是全球惡性腫瘤死亡率的第二位，胃癌預(yù)后與診斷時(shí)期密切相關(guān)。但是目前臨床上缺乏高敏感性和特異性的有效胃癌診斷分子標(biāo)志物。尋找和驗(yàn)證新的胃癌變監(jiān)測(cè)和早期診斷分子標(biāo)志物，對(duì)胃癌診斷和早期治療具有重要意義。
　　本研究通過(guò)胃癌、癌前病變、健康志愿者外周血樣本miRNA測(cè)序發(fā)現(xiàn)了一組胃癌癌變相關(guān)的miRNA，通過(guò)聚類(lèi)分析及統(tǒng)計(jì)學(xué)方法篩選出可能的胃癌相關(guān)差異表達(dá)miRNA，并通過(guò)qRT-PCR技術(shù)驗(yàn)證得到miR-331-3p和miR-19

2、7在胃癌、癌前病變、健康人外周血中存在明顯差異表達(dá)。同時(shí)，我們通過(guò)Logistic回歸方法建立的基于qRT-PCR檢測(cè)分析的胃癌監(jiān)測(cè)模型，并擴(kuò)大樣本對(duì)普通人群進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)miR-331-3p和miR-197在健康人、癌前病變患者、胃癌患者外周血中的表達(dá)呈不同變化走向，并能基本區(qū)分3類(lèi)患者，證明聯(lián)合檢測(cè)miR-331-3p和miR-197可能具有對(duì)胃癌變過(guò)程進(jìn)行監(jiān)測(cè)，早期檢測(cè)胃癌的重要價(jià)值。miR-331-3p和miR-197可能成為潛

3、在的可用于臨床的胃癌變監(jiān)測(cè)和早期胃癌診斷的分子標(biāo)志物。
　　研究步驟
　　1.胃癌外周血miRNA測(cè)序及分析
　　①第二代高通量測(cè)序分別檢測(cè)6例胃癌患者、6例胃癌前病變患者、6例健康志愿者外周血樣本miRNA表達(dá)圖譜;
　?、趯⑺袡z測(cè)到的小RNA與各類(lèi)RNA的比對(duì)、注釋情況進(jìn)行總結(jié);
　?、蹖?duì)不同樣品中表達(dá)的miRNA進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，判斷其在胃癌患者、胃癌前病變患者、健康志愿者間表達(dá)量是否存在顯著性差異;

4、
　　④預(yù)測(cè)可能與胃癌相關(guān)的新的miRNA。
　　2.胃癌外周血miRNA可能標(biāo)志物的篩選及初步驗(yàn)證
　?、偻ㄟ^(guò)聚類(lèi)分析及統(tǒng)計(jì)學(xué)方法篩選進(jìn)一步驗(yàn)證胃癌外周血分子標(biāo)志物的候選,miRNAs;
　　②利用實(shí)時(shí)PCR定量對(duì)6個(gè)候選miRNAs(miR-331-3p、miR-197、miR-23b*、miR-1260b、miR-3138、miR-3175)進(jìn)行小規(guī)模初步驗(yàn)證（n=46，胃癌患者15例，胃癌前患者16例，健

5、康志愿者15例）;
　　③根據(jù)實(shí)時(shí)PCR結(jié)果，初步確定miR197和miR331-3p為潛在的分子標(biāo)志物，初步確定其判別胃癌的臨界值。
　　④對(duì)可能miRNA分子標(biāo)志物進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè)，預(yù)測(cè)其可能生物學(xué)功能。
　　3.胃癌前病變癌變?cè)\斷模型的建立及普通人群監(jiān)測(cè)
　?、俑鶕?jù)Logistic分析和qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果，構(gòu)建miR197和miR331-3p胃癌檢測(cè)模型，分析ROC曲線(xiàn)，確定檢測(cè)敏感度和特異度。
　

6、?、谶M(jìn)行普通人群檢測(cè)(n=302)，驗(yàn)證胃癌檢測(cè)模型的檢測(cè)效能，評(píng)估聯(lián)合檢測(cè)miR197和miR331-3p在胃癌變各階段監(jiān)測(cè)的價(jià)值。
　　②qRT-PCR檢測(cè)分析miR197和miR331-3p外周血檢測(cè)對(duì)胃癌(n=95)和其他腫瘤(n=20)的腫瘤特異性區(qū)分能力。
　　研究結(jié)果
　　1.外周血miRNA測(cè)序結(jié)果提示胃癌、癌前病交、健康人的外周血清中存在一組差異表達(dá)的miRNAs。
　　2.根據(jù)外周血miRNA

7、測(cè)序結(jié)果，通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，得到一組在胃癌、胃癌前病變及健康人之間可能存在差異表達(dá)的miRNAs: miR-331-3p、miR-197、miR-23b*、miR-1260b、miR-3138、miR-3175。
　　3.通過(guò)小規(guī)模qRT-PCR驗(yàn)證和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，明確mir-23b*、mir-197、 mir-331-3p在胃癌與非癌人群外周血中存在顯著性差異表達(dá)。
　　4.通過(guò)Logistic回歸方法建立了基于qRT-PCR

8、檢測(cè)分析的胃癌監(jiān)測(cè)模型，并發(fā)現(xiàn)mir-197和mir-331-3p在區(qū)分癌與非癌時(shí)，具有較高的敏感度(74％)和特異度(72％)。
　　5.結(jié)合普通人群外周血的miRNAs分析，發(fā)現(xiàn)miR-331-3p和miR-197在健康人、癌前病交患者、胃癌患者外周血中的表達(dá)呈不同變化走向，其中胃癌組miR331-3p、miR-197表達(dá)同樣具有明顯差異性，但是區(qū)別在miR331-3p較癌前組表達(dá)更升高，而miR-197癌前組表達(dá)差異又可以將

9、癌前與叫胃癌組和正常組做區(qū)分均明顯升高。
　　6.小樣本外周血的miRNAs分析顯示，發(fā)現(xiàn)miR-331-3p和miR-197在胃癌患者和其他腫瘤患者外周血中不存在明顯的表達(dá)差異。
　　7.生物信息學(xué)分析提示miR331-3p和miR197的靶基因與腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡及細(xì)胞周期調(diào)控密切相關(guān)。
　　研究結(jié)論
　　1.通過(guò)外周血miRNA測(cè)序得到一組在胃癌、胃癌前病變及健康人之間具有差異表達(dá)的miRNA。