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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
應(yīng)用跨胎盤RNA干擾技術(shù)抑制胚胎鼠BMP-4基因,為獲取基因下調(diào)小鼠探索經(jīng)濟(jì)高效技術(shù)。2006年O'Shea發(fā)現(xiàn)在小鼠胚胎早期用含單基因質(zhì)粒干擾可以跨過胎盤下調(diào)妊鼠靶基因引起子代鼠相關(guān)組織器官發(fā)育障礙,并產(chǎn)生畸形小鼠。本課題組在前期工作基礎(chǔ)條件下申請(qǐng)NSFC,歷時(shí)五年研究定量跨胎盤RNAi技術(shù)。其間,探索影響跨胎盤RNA干擾技術(shù)的條件并首次建立了相關(guān)技術(shù)平臺(tái);應(yīng)用該技術(shù)構(gòu)建先天性疾病模型動(dòng)物。
方法:
2、
構(gòu)建發(fā)育相關(guān)基因BMP-4下調(diào)質(zhì)粒。通過尾靜脈向孕鼠注射Ringer's液、pSES質(zhì)粒、pSES-SiBMP-4質(zhì)粒。部分孕鼠注射48小時(shí)后取出胚胎觀測(cè)胚胎發(fā)育變化,并應(yīng)用RT-PCR及Western blotting檢測(cè)BMP-4基因mRNA和蛋白質(zhì);部分孕鼠自然分娩后研究子代鼠生長(zhǎng)發(fā)育變化,并用恰當(dāng)?shù)臋z查診斷。
結(jié)果:
pSES-SiBMP-4組胚胎BMP-4基因mRNA及蛋白表達(dá)較Ri
3、nger's組、pSES組下調(diào)(P<0.05)。Ringer's組、pSES組胚胎鼠發(fā)育無明顯異常,pS ES-SiBMP-4組胚胎鼠頭部、胃腸道及脊柱發(fā)育異常。新生子代鼠中pSES-SiBMP-4組出現(xiàn)癲癇,腸息肉及先天性巨結(jié)腸。
結(jié)論:
早期胚胎鼠跨胎盤定量RNA干擾現(xiàn)實(shí)可行,可建立穩(wěn)定的定量跨胎盤RNA干擾技術(shù)平臺(tái)。該方法可用來定量研究基因功能,構(gòu)建基因下調(diào)模型動(dòng)物。
(1) RNAi質(zhì)粒
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