定量跨胎盤RNA干擾技術(shù)在模型動物建立的應(yīng)用.pdf

1、目的：
　　 應(yīng)用跨胎盤RNA干擾技術(shù)抑制胚胎鼠BMP-4基因，為獲取基因下調(diào)小鼠探索經(jīng)濟高效技術(shù)。2006年O'Shea發(fā)現(xiàn)在小鼠胚胎早期用含單基因質(zhì)粒干擾可以跨過胎盤下調(diào)妊鼠靶基因引起子代鼠相關(guān)組織器官發(fā)育障礙，并產(chǎn)生畸形小鼠。本課題組在前期工作基礎(chǔ)條件下申請NSFC，歷時五年研究定量跨胎盤RNAi技術(shù)。其間，探索影響跨胎盤RNA干擾技術(shù)的條件并首次建立了相關(guān)技術(shù)平臺;應(yīng)用該技術(shù)構(gòu)建先天性疾病模型動物。
　　 方法：

2、
　　 構(gòu)建發(fā)育相關(guān)基因BMP-4下調(diào)質(zhì)粒。通過尾靜脈向孕鼠注射Ringer's液、pSES質(zhì)粒、pSES-SiBMP-4質(zhì)粒。部分孕鼠注射48小時后取出胚胎觀測胚胎發(fā)育變化，并應(yīng)用RT-PCR及Western blotting檢測BMP-4基因mRNA和蛋白質(zhì);部分孕鼠自然分娩后研究子代鼠生長發(fā)育變化，并用恰當?shù)臋z查診斷。
　　 結(jié)果：
　　 pSES-SiBMP-4組胚胎BMP-4基因mRNA及蛋白表達較Ri

3、nger's組、pSES組下調(diào)(P＜0.05)。Ringer's組、pSES組胚胎鼠發(fā)育無明顯異常，pS ES-SiBMP-4組胚胎鼠頭部、胃腸道及脊柱發(fā)育異常。新生子代鼠中pSES-SiBMP-4組出現(xiàn)癲癇，腸息肉及先天性巨結(jié)腸。
　　 結(jié)論：
　　 早期胚胎鼠跨胎盤定量RNA干擾現(xiàn)實可行，可建立穩(wěn)定的定量跨胎盤RNA干擾技術(shù)平臺。該方法可用來定量研究基因功能，構(gòu)建基因下調(diào)模型動物。
　　 (1) RNAi質(zhì)粒