隨機RNA文庫技術的建立及其應用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、指數(shù)式富集的配體系統(tǒng)進化(SELEX)技術是近年來發(fā)展起來的研究核酸結(jié)構、功能及進化的一種新的組合化學技術.它在基礎醫(yī)學、臨床診斷及藥物篩選方面具有廣泛的應用前景.該研究的目的是建立并完善隨機RNA文庫技術,并篩選牛凝血酶和噬菌體末端酶大亞基gp16特異結(jié)合的抑制性RNA配基,為新型藥物篩選及抗病毒研究提供理論基礎及實驗依據(jù).該研究利用基因工程方法在大腸桿菌表達并純化了T7RNA聚合酶,該酶具有很好的體外轉(zhuǎn)錄活性.1mg純化的T7RNA

2、聚合酶相當于250U Promega產(chǎn)品.我們采用全長68nt,隨機區(qū)由25個堿基構成的RNA文庫,篩選獲得了與牛凝血酶特異結(jié)合的配基.配基高度富集為2條序列,它們與牛凝血酶的親和力較高,解離常數(shù)分別為164nmol/L和240nmol/L.RNA配基能夠體外抑制牛凝血酶的催化酶切活性,是作用在牛凝血酶的肝素結(jié)合位點上.對其進行結(jié)構分析表明,隨機區(qū)形成的莖環(huán)結(jié)構是其發(fā)揮活性的結(jié)構基礎.針對配基的基礎結(jié)構設計并篩選到能夠迅速逆轉(zhuǎn)RNA配基

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