微小RNA在膿毒癥患兒外周血的表達的初步研究.pdf

1、膿毒癥是指由感染導(dǎo)致的全身性炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)，病情往往進展迅速，且患病人數(shù)逐年增加。如果不能采取有效措施控制早期持續(xù)的SIRS，尤其在兒童膿毒癥患者，可發(fā)展為膿毒性休克、多器官功能障礙綜合征(MODS)，已成為兒科重癥監(jiān)護病房(PICU)危重患兒主要死亡原因，同時增加了患兒家庭的經(jīng)濟負擔(dān)。盡管目前膿毒癥的診斷和治療取得了很大進展，但在過去的幾年里致死率仍然較高。所以對膿毒癥的早期診斷和治療顯得尤為重要。但是膿毒癥早期的臨床表現(xiàn)

2、和非感染因素引起SIRS非常相似，很難鑒別。傳統(tǒng)的反應(yīng)感染的指標如體溫、白細胞計數(shù)、紅細胞沉降率等的敏感性和特異性均難以滿足臨床需要。C反應(yīng)蛋白(CRP)、降鈣素原(PCT)等指標也不能有效的把由非感染因素引起的SIRS與膿毒癥及其嚴重程度鑒別開，有必要找到一種理想的膿毒癥生物標志物進行早期診斷、判斷預(yù)后，并能夠區(qū)分感染以及非感染引起的SIRS。
　　 微小RNA（miRNA）是一類小的非編碼RNA，廣泛參與調(diào)控細胞的生長、發(fā)育

3、、分化及凋亡等各個環(huán)節(jié)，并與生理狀態(tài)的改變以及疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。既往研究表明，不同疾病人群的血清、血漿或者組織中miRNA表達不同，近年來已經(jīng)相繼在許多疾?。ㄈ缒[瘤、急性心肌梗死、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、糖尿病、腎病、炎癥性腸病、藥物性肝損傷等）都證實了血清或血漿中的某種miRNA水平可以作為疾病的生物學(xué)標志物。miRNA作為轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)基因，與膿毒癥相關(guān)信號途徑和免疫功能調(diào)控相關(guān)。本研究就是觀察在小兒膿毒癥的外周血中和炎癥有關(guān)的miRN

4、A的表達水平。
　　 目的:建立從血漿和外周血CD14+單核細胞(MC)中提取循環(huán)miRNA的方法。比較在小兒膿毒癥、其它非感染因素引起的SIRS、健康兒童三組人群中表達差異的循環(huán)miRNA水平。比較小兒膿毒癥表達差異的循環(huán)miRNA與其它炎性指標TNF-α、IL-10水平的相關(guān)性。尋找敏感性和特異性較CRP、PCT更好的早期診斷小兒膿毒癥的生物學(xué)標志物。
　　 方法:選取2012年8月～2013年03月在重慶醫(yī)科大學(xué)附

5、屬深圳市兒童醫(yī)院PICU住院的35例膿毒癥患兒，男23例，女12例，平均年齡1.82±1.17歲。根據(jù)患兒病情嚴重程度分為一般膿毒癥（19例）和嚴重膿毒癥（16例）。選取同期住院的15例外科手術(shù)后患兒作為SIRS組及15例來醫(yī)院體檢的同齡健康兒童作為對照組。選擇與炎癥反應(yīng)密切相關(guān)的6個miRNA(miR-21、miR-125b、miR-132、miR-146a、miR-155、miR-223)為目的miRNA，利用實時熒光定量PCR(q

6、RT-PCR)技術(shù)，檢測并比較其在小兒膿毒癥患者、非感染SIRS病人和健康對照人群血漿和外周血CDI4+MC中的表達水平。利用流式CBA技術(shù)檢測血漿中TNF-α和IL-10的水平。使用ROC曲線下面積(AUC)比較差異表達的miRNA與臨床廣泛開展的實驗室指標CRP、PCT的靈敏度和特異度。
　　 結(jié)果:各組年齡、性別比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。本研究成功從外周血標本的血漿及CD14+MC中提取出miRNA。相對于SI

7、RS組和對照組，膿毒癥患兒血漿中miR146a、miR-223及外周血CD14+MC中miR-146a的表達上調(diào)，外周血CD14+MC中miR-223表達下調(diào)，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。SIRS組血漿TNF-α水平較對照組升高;一般膿毒癥組患兒血漿中TNF-α水平較嚴重膿毒癥患兒升高。膿毒癥組血漿IL-10、IL-10/TNF-α水平較SIRS組和健康對照組均升高。 IL-10、IL-10/TNF-α與CD14+MC中miR-

8、223水平呈負相關(guān);與血漿和CD14+MC中miR-146a水平呈正相關(guān)。CD14+MC中miR-223、血漿中miR-146a的AUC（0.750和0.813）均大于CRP(0.555)和PCT(0.683)。前者的靈敏度為62.86％，特異度為80％;后者的靈敏度為51.43％，特異度為100％。
　　 結(jié)論:利用qRT-PCR方法能夠成功提取檢測外周血血漿和CD14+MC中的miRNA。相對于SIRS及健康兒童，膿毒癥患兒