酵母雙雜交篩選NLRP3相互作用蛋白質(zhì).pdf

1、在哺乳動物體內(nèi)，存在多套免疫識別系統(tǒng)，通過維持機(jī)體與共生菌群的正常互動以及響應(yīng)外來病原和刺激的免疫反應(yīng)，從而維持組織穩(wěn)態(tài)。與主要識別微生物來源病原相關(guān)分子模式的、存在于內(nèi)吞體和細(xì)胞膜上的Toll-like receptors(TLRs)不同，定位于胞內(nèi)的Nod-like receptors(NLRs)不僅識別胞內(nèi)病原相關(guān)分子模式，也識別宿主來源的損傷相關(guān)分子模式，比如機(jī)體因脅迫、組織損傷和細(xì)胞死亡而產(chǎn)生的內(nèi)源危險(xiǎn)信號。
　　NLR

2、s是重要的胞質(zhì)內(nèi)模式識別受體，研究發(fā)現(xiàn)其大多數(shù)成員能構(gòu)成一個(gè)大的分子平臺[1]，如最初發(fā)現(xiàn)由NLRP1、ASC、caspase-1和caspase-5構(gòu)成，這個(gè)大的復(fù)合物被定義為“inflammasome”，即炎癥小體，它被證明是促炎細(xì)胞因子IL-1β（Interleukin-1β）活化所必需的。之后，許多NLRs[2-5]家族和PYHINs[6-12]家族的感受蛋白也相續(xù)被證明能在各種 Damage-associated molecu

3、lar patterns(DAMPs)和Pathogen-associated molecular patterns（PAMPs）刺激下形成功能性炎癥小體。現(xiàn)在，炎癥小體的提出已被公認(rèn)為細(xì)胞內(nèi)免疫監(jiān)視系統(tǒng)里程碑式的發(fā)現(xiàn)。機(jī)體內(nèi)，炎癥小體廣泛參與了抗微生物感染的先天性免疫反應(yīng)，其中研究得最廣泛、最深入[13]的就是NLRP3(NLR family，pyrin domaincontaining3)炎癥小體。基于NLRP3炎癥小體的分子靶向治

4、療目前也正在研究當(dāng)中。因此，深入發(fā)掘NLRP3信號通路分子調(diào)控機(jī)制，有可能為揭示炎癥、免疫及疾病之間的相互關(guān)系提供重要依據(jù)，同時(shí)為某些疾病治療提供新的靶點(diǎn)。
　　近年來，通過對NLRP3炎癥小體及其相互作用蛋白質(zhì)[14,15]的研究，增加了人們對NLRP3功能調(diào)控的認(rèn)識。因此，為進(jìn)一步探索關(guān)于炎癥小體的信號調(diào)控機(jī)制及其生物學(xué)功能提供基礎(chǔ)，本項(xiàng)研究通過酵母雙雜交的技術(shù)手段篩選與NLRP3相互作用的蛋白質(zhì)。以NLRP3三個(gè)基本結(jié)構(gòu)域P

5、YD、NACHT、LRR為誘餌，在人白細(xì)胞cDNA文庫中篩選其相互作用蛋白質(zhì)。經(jīng)過酵母細(xì)胞內(nèi)進(jìn)一步驗(yàn)證，我們從87個(gè)初步陽性克隆中篩選出了4個(gè)與NLRP3相互作用的候選陽性克隆，即ECHS1(enoyl CoA hydratase, shortchain,1)、UB E2I(ubiquitinconjugatingenzyme E2I)、RPL34(ribosomal protein L34)以及PXN(paxillin)。進(jìn)一步在真核