應用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選與CERKL相互作用的蛋白.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、華中科技大學碩士學位論文應用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選與CERKL相互作用的蛋白姓名：王磊申請學位級別：碩士專業(yè)：無機化學指導教師：楊祥良劉木根20080605華中科技大學碩士學位論文華中科技大學碩士學位論文IIABSTRACTRetinitispigmentosa(RP)isageicallyheterogeneousdisderacterizedbyprogressivelossofphoteceptsbyapoptosis.In1998a

2、SpanishgroupperfmedlinkageanalysisinalargenuclearSpanishfamilywithautosomalrecessiveretinitispigmentosafinemappedtheRP26locusinthisfamilytoa2.5Mbregiononchromosome2q31.2q32.3.TheyidentifiedanovelgeneCERKLintheRP26critica

3、llinkageregionfoundahomozygousmutationinexon5ofthegeneintwoSpanishfamilies.HoweverthephysiologicalfunctionsofCERKLinretinamolecularmechanismbywhichCERKLmutationcausingRPremainsunclear.Therehavebeenonly5publicationsonCERK

4、Lrepteduntilnow.IndertostudybiologyfunctionofCERKLrevealitspathwayintheretinaweclonedthefulllengthCERKLgenescreenedtheproteinsinteractedwithCERKLbyusingYeastTwoHybridSystem.WefirstlyclonedthefulllengthCERKLgeneusingneste

5、dPCRfromHeLacellcDNAlibrary.SecondlytheYeastTwoHybridSystem(Clontech)wasusedtoscreenahumanpancreasGAL4ADcDNAlibrarywithhumanCERKLcDNAfusedtoGAL4BDinplaspGBKT7asbait.ThenwetransfmedthepGBKT7CERKLintoyeastAH109toexaminethe

6、toxicityselfactivationofpGBKT7CERKLplas.AfterthatpGBKT7CERKLthelibraryplassweretransfmedsequentiallyintoyeaststrainAH109.ThetransfmantswereplatedonSDagartoscreenfinteractingpartnersaccdingtothemanufacturer’sinstructions.

7、560preliminarypositivecloneswerefurthercheckedbyphenotypesretestingclonesstingαgalactosidaseactivitydetectingtoexcludethefalsepositiveclones.PlassrecoveredfrompositivecloneswereamplifiedbyPCRfthessequenced.Thesequencingr

8、esultsofthecidatecloneswereanalyzedusingtheBLASTdatabasetofindthepotentialinteractionofproteins.TwoproteinsCTRC（HomosapienschymotrypsinCpreproprotein）EIF3S9（Homosapienseukaryotictranslationinitiationfact3subunit9）wereide

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