纈草萜內(nèi)酯體外對(duì)次氮基三醋酸鐵誘導(dǎo)肝星狀細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的:
　　觀察纈草萜內(nèi)酯對(duì)肝星狀細(xì)胞增殖的影響,旨在探討其體外是否具有抗肝纖維化作用,從而為臨床治療該疾病提供一定的理論依據(jù)。
　　方法:
　　采用體外實(shí)驗(yàn),分為空白對(duì)照組、模型組、纈草萜內(nèi)酯A、B、C組及陽性對(duì)照組。引進(jìn)肝星狀細(xì)胞株并傳代培養(yǎng),選擇細(xì)胞對(duì)數(shù)增長(zhǎng)期,用0.2％胰蛋白酶消化,加入含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液,吹打成單細(xì)胞懸液,以每孔7000-8000個(gè)細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板,培養(yǎng)至單層貼壁近鋪滿板底

2、,除空白組之外其他各組均用含有次氮基三醋酸鐵的培養(yǎng)液誘導(dǎo)細(xì)胞增殖,每孔加培養(yǎng)液180μl,纈草萜內(nèi)酯組均加入不同濃度的A、B、C三種藥物各20μl(200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL、5μg/mL),陽性對(duì)照組加入秋水仙堿20μl(0.5μg/mL)空白對(duì)照組及模型組加入等量的生理鹽水。在光鏡下觀察細(xì)胞數(shù)量、形態(tài)。用MTT比色法觀察細(xì)胞的增殖,計(jì)算抑制率。
　　結(jié)果:
　　結(jié)果表明,纈草萜內(nèi)酯

3、A、B、C(200μg/mL)三種藥物對(duì)細(xì)胞抑制率分別為40%、36.4%、36.6%,與模型組比較差異有顯著性(P<0.05);纈草萜內(nèi)酯A、B、C(200μg/mL)組的OD值(570nm)分別為:0.231±0.014、0.245±0.025、0.244±0.018,與模型組比較,差異均有顯著性(P<0.01);纈草萜內(nèi)酯A、B、C(100μg/mL)對(duì)細(xì)胞抑制率分別為27.5%、21.3%、25.5%,與模型組比較差異有顯著性(

4、P<0.05),纈草萜內(nèi)酯A、B、C(100μg/mL)組的OD(570nm)值分別為0.279±0.021、0.303±0.015、0.287±0.015,與模型組比較,差異均有顯著性(P<0.01),但其它三個(gè)濃度組與模型組比較均未見顯著性差異(P>0.05);纈草萜內(nèi)酯A、B、C200μg/mL和100μg/mL劑量組分別與陽性對(duì)照組OD值比較,差異均無顯著性(P>0.05);模型組與陽性對(duì)照組OD值比較差異有顯著性(P<0.05

5、)。光鏡下觀察:模型組細(xì)胞數(shù)量較多,HSC細(xì)胞生長(zhǎng)呈均勻的梭形,多邊形或長(zhǎng)條形,折光性好,很少有細(xì)胞碎片和漂浮的細(xì)胞。而在A、B、C200μg/mL及A、B、C100μg/mL劑量組以及陽性對(duì)照組孔內(nèi)細(xì)胞突觸消失,形態(tài)變圓,折光性差,可見細(xì)胞碎片,胞液可見漂浮的細(xì)胞。在光鏡下觀察200μg/mL組與100μg/mL組,其差別不明顯。
　　結(jié)論:
　　1、纈草萜酯A、B、C高劑量組(200μg/mL)具有明顯抑制肝星狀細(xì)胞增殖