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1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文RNA干擾逆轉(zhuǎn)骨髓瘤細(xì)胞耐藥的研究AresearchofRNAinterferenceinreversingdrugresistanceofmultiplemyeloma專業(yè)名稱:魚煎凼科堂申請人姓名:童犍導(dǎo)師:奎塑塑r籃答辯委員會主席:壓泣蛐答辯委員會成毽塑縫孝嘲邋中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院血液內(nèi)科20055中國廣州510080篋口E(RNA干擾逆轉(zhuǎn)骨髓瘤細(xì)胞耐藥的研究研究RNA干擾對survivin基因的沉默效率及其與
2、時間的關(guān)系。并以熒光顯微鏡觀察干擾前后細(xì)胞的凋亡情況,計(jì)算凋亡率。細(xì)胞毒分析方法比較轉(zhuǎn)染survivinsiRNA前后,KM3細(xì)胞在不同濃度化療藥阿霉素的作用下細(xì)胞的死亡,計(jì)算IC50值,比較轉(zhuǎn)染前后對阿霉素敏感性的變化。結(jié)果:1正常人和MM患者survivin表達(dá)的差異:29例骨髓瘤患者中,22例survivinmRNA表達(dá)陽性,陽性率759%,明顯高于正常人222%的表達(dá)率(PO05)。且骨髓瘤患者survivin表達(dá)水平顯著高于『
3、F常組,survivin/8actinEL值分別為049O29和006004,差異有顯著意義(P0叭)。Westernblot方法檢Nsurvivin在蛋白質(zhì)水平的表達(dá),發(fā)現(xiàn)『F常人骨髓中表達(dá)均陰性,骨髓瘤患者陽性率為48_3%。2初治和難治/復(fù)發(fā)MM患者survivin表達(dá)的差異:survivinmRNA在兩組表達(dá)陽性率分別為705%和833%,差別無顯著性,但耐藥組表達(dá)水平(survivin/Bactin比值)達(dá)069O34,初治組
4、為03l024,耐藥組明顯為高(P0,05)。在蛋白質(zhì)水平,初治和復(fù)發(fā)/難治組陽性率分別為411%和583%,二者無明顯差異,但Survivin/Ⅱ一tubulin半定量比值分別為011007豐1]021012,復(fù)發(fā)/難治組表達(dá)水平明顯為高,差別有顯著意義(P005)。3初治骨髓瘤患者survivin蛋白表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系:7例survivin表達(dá)陽性的初治患者,4例PR,l例MR,2例NC,治療有效率(CRPRMR)714%;10例su
5、rvivin表達(dá)陰性的初治患者,2例CR,4例PR,2例MR,2例NC,有效率80%,略高于陽性組。但統(tǒng)計(jì)學(xué)分析未發(fā)現(xiàn)兩組治療有效率之間存在顯著差異。4survivinsiRNA在骨髓瘤KM3細(xì)胞系能有效地下調(diào)靶基因的表達(dá)。轉(zhuǎn)染survivinsiRNA后24h,即觀察到mRNA和蛋白質(zhì)水平的下調(diào),但程度較少,分別為12%和94%。轉(zhuǎn)染后48h,survivin的mRNA和蛋白質(zhì)水平分別下調(diào)了614%年n386%。但72h后,survi
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