RNA干擾逆轉(zhuǎn)骨髓瘤細(xì)胞耐藥的研究.pdf

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文RNA干擾逆轉(zhuǎn)骨髓瘤細(xì)胞耐藥的研究AresearchofRNAinterferenceinreversingdrugresistanceofmultiplemyeloma專業(yè)名稱：魚煎凼科堂申請(qǐng)人姓名：童犍導(dǎo)師：奎塑塑r籃答辯委員會(huì)主席：壓泣蛐答辯委員會(huì)成毽塑縫孝嘲邋中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院血液內(nèi)科20055中國(guó)廣州510080篋口E(RNA干擾逆轉(zhuǎn)骨髓瘤細(xì)胞耐藥的研究研究RNA干擾對(duì)survivin基因的沉默效率及其與

2、時(shí)間的關(guān)系。并以熒光顯微鏡觀察干擾前后細(xì)胞的凋亡情況，計(jì)算凋亡率。細(xì)胞毒分析方法比較轉(zhuǎn)染survivinsiRNA前后，KM3細(xì)胞在不同濃度化療藥阿霉素的作用下細(xì)胞的死亡，計(jì)算IC50值，比較轉(zhuǎn)染前后對(duì)阿霉素敏感性的變化。結(jié)果：1正常人和MM患者survivin表達(dá)的差異：29例骨髓瘤患者中，22例survivinmRNA表達(dá)陽(yáng)性，陽(yáng)性率759％，明顯高于正常人222％的表達(dá)率(PO05)。且骨髓瘤患者survivin表達(dá)水平顯著高于『

3、F常組，survivin／8actinEL值分別為049O29和006004，差異有顯著意義(P0叭)。Westernblot方法檢Nsurvivin在蛋白質(zhì)水平的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)『F常人骨髓中表達(dá)均陰性，骨髓瘤患者陽(yáng)性率為48_3％。2初治和難治／復(fù)發(fā)MM患者survivin表達(dá)的差異：survivinmRNA在兩組表達(dá)陽(yáng)性率分別為705％和833％，差別無(wú)顯著性，但耐藥組表達(dá)水平(survivin／Bactin比值)達(dá)069O34，初治組

4、為03l024，耐藥組明顯為高(P0，05)。在蛋白質(zhì)水平，初治和復(fù)發(fā)／難治組陽(yáng)性率分別為411％和583％，二者無(wú)明顯差異，但Survivin／Ⅱ一tubulin半定量比值分別為011007豐1]021012，復(fù)發(fā)／難治組表達(dá)水平明顯為高，差別有顯著意義(P005)。3初治骨髓瘤患者survivin蛋白表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系：7例survivin表達(dá)陽(yáng)性的初治患者，4例PR，l例MR，2例NC，治療有效率(CRPRMR)714％；10例su

5、rvivin表達(dá)陰性的初治患者，2例CR，4例PR，2例MR，2例NC，有效率80％，略高于陽(yáng)性組。但統(tǒng)計(jì)學(xué)分析未發(fā)現(xiàn)兩組治療有效率之間存在顯著差異。4survivinsiRNA在骨髓瘤KM3細(xì)胞系能有效地下調(diào)靶基因的表達(dá)。轉(zhuǎn)染survivinsiRNA后24h，即觀察到mRNA和蛋白質(zhì)水平的下調(diào)，但程度較少，分別為12％和94％。轉(zhuǎn)染后48h，survivin的mRNA和蛋白質(zhì)水平分別下調(diào)了614％年n386％。但72h后，survi