石榴皮提取物對(duì)血細(xì)胞生理特性的影響.pdf

1、多酚類(lèi)化合物廣泛存在于石榴的果皮、葉、果實(shí)、籽、根中,以石榴皮中的含量最高,達(dá)10-21％.前人的研究表明,石榴皮多酚具有抗腫瘤、抗氧化、殺菌、抗炎等多種藥理作用.但石榴皮多酚對(duì)血細(xì)胞生理特性的影響未見(jiàn)報(bào)道.本研究采用不同溫度溶劑浸提法制備石榴皮多酚粗提物,對(duì)其進(jìn)行紅細(xì)胞脆性、血沉、出血時(shí)間、抗凝血、抑制動(dòng)脈血栓的形成作用做了系列研究,為石榴皮多酚藥用價(jià)值的開(kāi)發(fā)利用及抗血栓藥物的研發(fā)提供新思路.
　　本文實(shí)驗(yàn)研究分為四部分:

2、>　　一、采用不同提取條件制備石榴皮多酚粗提物、除多酚石榴皮提取物.石榴皮多酚的制備,分別采用低溫水提、中溫1、中溫2、高溫醇提,料液比均為1:30,重復(fù)浸提兩次,每次提取時(shí)間為7h.除多酚石榴皮提取物的制備,采用一定溫度醇提,料液比為1:20,浸提3h.粗提物得率=多酚粗提物質(zhì)量/原料質(zhì)量×100％,以沒(méi)食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品,用Folin-Ciocalteu試劑比色法測(cè)定石榴皮多酚粗提物的純度,用精確pH試紙測(cè)定其pH值.結(jié)果發(fā)現(xiàn):水提物和

3、醇提物的得率分別為39.30％、38.10％、38.40％、42.10％.水提石榴皮多酚粗提物的pH值為3.8,醇提的石榴皮多酚粗提物的pH值為4.1,且不同溫度醇提的多酚的pH值間無(wú)差別;水提和醇提得到的多酚粗提物的純度分別為27.94％、24.44％、25.35％、27.87％.除多酚石榴皮提取物的檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn),其提取物中無(wú)多酚.
　　二、石榴皮多酚對(duì)家兔凝血、出血時(shí)間、血沉及紅細(xì)胞脆性的影響.采用試管法研究了石榴皮多酚體外給

4、藥(3.8％)及灌胃(50mg/kg)兩種方式對(duì)體外血液凝固的影響;采用多酚(50mg/kg,500mg/kg)灌胃測(cè)定耳緣靜脈出血時(shí)間,觀察多酚對(duì)出血時(shí)間的影響;采用韋氏法體外給藥(0.5、5、50mg/mL),觀察多酚對(duì)血細(xì)胞沉降率的影響;采用體外給藥(50mg/ml)NaCl濃度梯度法,觀察多酚對(duì)紅細(xì)胞脆性的影響.結(jié)果發(fā)現(xiàn):與對(duì)照組比較,無(wú)論體外給藥還是灌胃給藥,石榴皮多酚均使凝血時(shí)間極顯著延長(zhǎng)(P＜0.01);耳緣靜脈的出血時(shí)間

5、,低濃度多酚組差異不顯著(P＞0.05);高濃度多酚組明顯縮短了出血時(shí)間(P＜0.01);明顯的減小了血沉值(P＜0.01);紅細(xì)胞脆性組間差異不顯著(P＞0.05).提示:一定劑量范圍的石榴皮多酚具有抗凝血作用,可增加細(xì)胞的懸浮性,縮短耳緣靜脈出血時(shí)間;對(duì)紅細(xì)胞脆性影響不明顯.
　　三、建立FeCl3誘導(dǎo)家兔頸總動(dòng)脈內(nèi)形成血栓模型.動(dòng)物隨機(jī)分為4組,即生理鹽水處理30min組和三氯化鐵局部處理30min、15min、10min,

6、3個(gè)組,每組N=3.用浸透60％的FeCl3的濾紙片包繞麻醉家兔雙側(cè)頸總動(dòng)脈不同時(shí)間,過(guò)量麻醉劑處死動(dòng)物,取家兔雙側(cè)頸總動(dòng)脈稱(chēng)重,檢測(cè)血栓重量,病理切片檢測(cè)家兔頸總動(dòng)脈內(nèi)血栓大小和密度,確定血栓形成的程度,篩選進(jìn)行抗血栓藥物實(shí)驗(yàn)的最佳動(dòng)物模型.結(jié)果顯示:以60％的FeCl3處理15min形成的血栓近似閉塞型,且較靈敏的反應(yīng)藥物對(duì)血栓形成的影響.
　　四、石榴皮多酚對(duì)FeCl3誘導(dǎo)家兔動(dòng)脈血栓形成的影響.家兔隨機(jī)分成病理切片組和超聲

7、檢查組.病理切片組又分成對(duì)照I組(三蒸水灌胃+生理鹽水浸潤(rùn)的濾紙包繞15min),對(duì)照II組(三蒸水灌胃+FeCl3浸潤(rùn)的濾紙包繞),對(duì)照III組(灌胃多酚+生理鹽水浸潤(rùn)的濾紙包繞),實(shí)驗(yàn)I組(灌胃多酚+FeCl3浸潤(rùn)的濾紙包繞),實(shí)驗(yàn)II組(除多酚石榴皮提取物灌胃+FeCl3濾紙包繞).超聲檢查組的動(dòng)物分組除減少了對(duì)照III組,實(shí)驗(yàn)組又增加了一個(gè)濃度的對(duì)比組外,其他同病理切片組,每組N=3.病理切片組,在灌胃給藥后1 h,麻醉、手術(shù)分

8、離雙側(cè)頸總動(dòng)脈,60％的FeCl3局部外敷處理15min,取其頸總動(dòng)脈,固定、切片、H.E染色,觀察血栓密度,動(dòng)脈管腔直徑,動(dòng)脈管壁厚度;超聲組,用二維超聲儀檢測(cè)家兔頸總動(dòng)脈FeCl3局部外敷處理15min前后,各組的血流速度、血流阻力指數(shù)及心率.結(jié)果發(fā)現(xiàn):與對(duì)照組比較,石榴皮多酚組的病理切片顯示血栓密度低,頸總動(dòng)脈管腔大(P＜0.05),壁薄(P＞0.05).結(jié)果提示,石榴皮多酚可使血管擴(kuò)張,保護(hù)血管內(nèi)皮,抑制血栓的形成.超聲結(jié)果顯示

9、,與FeCl3處理前比較,FeCl3處理后對(duì)照II組、實(shí)驗(yàn)組的心縮末期血液流速(PS)、心舒末期血液流速(ED)、血流阻力指數(shù)(RI)心率(HR)均變快,但是差異均不顯著(P＞0.05);500mg/kg石榴皮多酚組的血液流速,血流阻力指數(shù),心率增加的幅度小于對(duì)照II組;然而,500mg/kg石榴皮除多酚組結(jié)果與多酚組相反.結(jié)果提示,雖然500mg/kg石榴皮多酚可使頸總動(dòng)脈血栓造成的狹窄低于對(duì)照II組和除多酚石榴皮組,石榴皮多酚有一定

10、的抗 FeCl3處理誘導(dǎo)的動(dòng)脈血栓形成作用;但是對(duì)在體動(dòng)脈血流的影響并不顯著.
　　綜上所述,不同溫度溶劑浸提法可以制備抗家兔血液凝固的石榴皮多酚.以中溫醇提得到的多酚抗家兔血液凝固效果最好.中溫醇提石榴皮多酚還具有增加細(xì)胞的懸浮性,縮短耳緣靜脈出血時(shí)間作用.中溫醇提石榴皮多酚可使 FeCl3誘導(dǎo)家兔頸總動(dòng)脈動(dòng)脈血栓減小,血栓密度降低,血管擴(kuò)張,峰值流速減小,呈現(xiàn)一定的抗家兔動(dòng)脈血栓形成作用.關(guān)于石榴皮多酚抗動(dòng)脈血栓形成的作用機(jī)理