苗藥頭花蓼對(duì)幽門(mén)螺桿菌感染小鼠G、D細(xì)胞的影響.pdf

1、目的：建立幽門(mén)螺桿菌（Helicobacter pylori,Hp）SS2000(Sydney strain2000)感染 C57BL/6小鼠動(dòng)物模型，比較苗藥頭花蓼各劑量組以及與阿莫西林聯(lián)用時(shí)對(duì)Hp慢性胃炎小鼠胃粘膜的Hp清除作用和修復(fù)保護(hù)作用，通過(guò)研究頭花蓼對(duì)Hp感染小鼠胃粘膜內(nèi)分泌細(xì)胞G、D細(xì)胞和GAS mRAN、SS mRNA的影響，探討頭花蓼保護(hù)修復(fù)Hp所致的胃粘膜損傷的作用機(jī)理，為臨床治療Hp慢性胃炎及新藥的研發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)

2、。
　　方法：(1)瓊脂稀釋法檢測(cè)苗藥頭花蓼對(duì)Hp悉尼株SS2000的最低抑菌濃度（Minimal inhibitory concentration，MIC）。(2)將110只無(wú)特定病原體（specific pathogen free SPF）級(jí)C57BL/6小鼠隨機(jī)分為模型組（90只）和空白組（20只），造模組以每只小鼠0.5mL Hp SS2000菌液進(jìn)行灌胃處理，間隔1d，共5次，空白組小鼠灌胃等量無(wú)菌腦心浸液肉湯，末次菌液

3、灌胃8w后處死空白組和造模組各10只小鼠，觀察Hp感染小鼠模型是否構(gòu)建成功。(3)成功建模后將造模組小鼠隨機(jī)分為8組（10只/組），分別進(jìn)行高、中、低劑量的頭花蓼和高、中、低劑量頭花蓼聯(lián)合阿莫西林（作為中西結(jié)合高、中、低劑量組）及三聯(lián)藥物和生理鹽水（模型組）灌胃治療，每天灌胃1次，連續(xù)2w，停藥4w后處死所有組小鼠，用胃粘膜快速尿素酶試驗(yàn)、細(xì)菌微需氧培養(yǎng)和Giemsa染色評(píng)定各組藥物對(duì) Hp的清除效果；HE染色判斷藥物對(duì)胃粘膜是否有保護(hù)

4、修復(fù)作用；胃粘膜免疫組織化學(xué)染色和圖像分析軟件（Image-Pro-Plus，IPP）檢測(cè)治療前后胃粘膜G細(xì)胞、胃泌素（Gastrin，GAS）灰度值和D細(xì)胞、生長(zhǎng)抑素（Somatostatin，SS）灰度值的變化，提取胃粘膜組織的RNA，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（real-time fluorescence quantification polymerase chain reaction，real-time PCR）分析給藥前后GAS、

5、SS mRNA的表達(dá)差異。
　　結(jié)果：(1)苗藥頭花蓼對(duì)Hp SS2000的體外抑菌活性MIC=4mg/mL；(2)接種Hp后8w，模型組小鼠胃胃粘膜Hp定植率為100％，HE染色結(jié)果顯示模型組小鼠胃粘膜均呈現(xiàn)慢性炎癥改變，證實(shí)Hp感染小鼠慢性胃炎的動(dòng)物模型構(gòu)建成功。(3)治療后小鼠胃粘膜幽門(mén)螺桿菌定植密度降低，其中中西結(jié)合高、中劑量組對(duì)Hp的清除作用明顯，與模型組比較有顯著意義（P＜0.05），三聯(lián)組可根除Hp；治療后胃粘膜的炎

6、癥浸潤(rùn)程度減輕，頭花蓼高劑量組和三聯(lián)組胃粘膜炎癥改善效果明顯，與模型組比較，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（4）Hp感染后小鼠胃粘膜的G細(xì)胞和GAS灰度值明顯增多（P＜0.05），GAS mRNA表達(dá)顯著上調(diào)（P＜0.05），D細(xì)胞和SS灰度值輕度增加，SS mRNA表達(dá)上調(diào)明顯（P＜0.05）。治療后，頭花蓼高、中劑量組和中西藥結(jié)合高、中劑量組G細(xì)胞和GAS灰度值降低明顯，GAS mRNA下調(diào)顯著，與模型組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜

7、0.05）。頭花蓼組和中西結(jié)合高、中劑量組及三聯(lián)組治療后，D細(xì)胞與SS灰度值下降不明顯，SS mRNA下調(diào)顯著（P＜0.05）；中西結(jié)合低劑量組D細(xì)胞及SS灰度值明顯降低（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.頭花蓼對(duì)Hp SS200具有較好的抑菌活性，MIC為4mg/mL。
　　2.Hp感染可導(dǎo)致胃粘膜受損，刺激G細(xì)胞分泌GAS，上調(diào)胃粘膜GAS mRNA的表達(dá)；反饋調(diào)節(jié)D細(xì)胞分泌SS輕度增加，SS mRNA表達(dá)上調(diào)