苗藥頭花蓼對(duì)Hp感染小鼠Th1-Th2型細(xì)胞因子表達(dá)水平的影響.pdf

1、目的：觀察苗藥頭花蓼對(duì)幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，Hp)相關(guān)性胃炎小鼠模型的治療效果，研究體內(nèi)、外頭花蓼對(duì)小鼠輔助性T細(xì)胞Ⅰ型（Helper T cells，Th1）與Ⅱ型（Helper T cells，Th2）細(xì)胞因子的影響，探討頭花蓼治療Hp相關(guān)性胃炎時(shí)所發(fā)揮的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制，為臨床治療Hp相關(guān)性胃炎及新藥的研發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：采用瓊脂稀釋法檢測(cè)頭花蓼對(duì)Hp小鼠適應(yīng)株SS2000的最低抑菌濃度(

2、Minimal inhibitory concentrations，MIC)。分離小鼠脾臟淋巴細(xì)胞，與不同濃度頭花蓼（1μg/mL、2μg/mL、4μg/mL、8μg/mL、16μg/mL、32μg/mL、64μg/mL、128μg/mL、256μg/mL、512μg/mL、1024μg/mL）共同培養(yǎng)，以0μg/mL為對(duì)照，采用CCK-8細(xì)胞活性檢測(cè)試劑盒（Cell Counting Kit-8，CCK-8)檢測(cè)頭花蓼對(duì)淋巴細(xì)胞的體外

3、增殖情況，用ELISA方法檢測(cè)不同濃度頭花蓼對(duì)體外培養(yǎng)淋巴細(xì)胞活化、分化過程中Thl及Th2型細(xì)胞因子細(xì)胞因子γ干擾素（interferon-γ，IFN-γ）和白介素4（interleukin-4，IL-4）水平的影響。采用灌胃接種法復(fù)制Hp感染C57BL/6小鼠的Hp相關(guān)性胃炎模型，同時(shí)設(shè)空白對(duì)照，模型復(fù)制成功后，將模型組小鼠分為頭花蓼及頭花蓼聯(lián)合阿莫西林的高、中、低濃度組，模型對(duì)照組和藥物對(duì)照組(阿莫西林、克拉霉素和奧美拉唑三聯(lián)藥物

4、)，各組以相應(yīng)藥物連續(xù)灌胃治療14d，空白對(duì)照組和模型組以無菌生理鹽水治療，停藥后第28d用ELISA方法檢測(cè)各組小鼠血清IFN-γ和IL-4含量，取胃粘膜組織做組織病理學(xué)檢查、Hp培養(yǎng)以及熒光定量檢測(cè)胃粘膜IFN-γ和IL-4mRNA轉(zhuǎn)錄水平變化。
　　結(jié)果：1.苗藥頭花蓼對(duì)SS2000的MIC為4mg/mL，其對(duì)Hp的抗菌作用與藥物濃度成正比。2．體外淋巴細(xì)胞培養(yǎng)：頭花蓼在＜128μg/mL時(shí)，體外對(duì)小鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖沒有明

5、顯的影響，≥128μg/mL濃度時(shí)，淋巴細(xì)胞數(shù)量開始明顯減少。頭花蓼＜64μg/mL濃度作用于經(jīng)刀豆蛋白 A(ConcaoavahnA，ConA)活化的淋巴細(xì)胞72h后可提高 IFN-γ的分泌，并呈劑量依賴性；頭花蓼8－128μg/mL濃度范圍內(nèi)具有刺激淋巴細(xì)胞分泌IL-4的作用。3.小鼠感染Hp第8周，模型組小鼠胃粘膜 Hp定量培養(yǎng)可達(dá)107CFU Hp/g，胃粘膜組織炎癥評(píng)分可達(dá)2.588+0.463，Hp相關(guān)性胃炎動(dòng)物模型復(fù)制成功

6、。4.三聯(lián)藥物組和頭花蓼高劑量組治療 Hp感染小鼠后炎癥程度顯著降低，炎癥評(píng)分分別為1.356+0.316和1.725+0.33，與模型組小鼠比較有顯著性意義（P＜0.05），頭花蓼中、低劑量組和頭花蓼聯(lián)合阿莫西林各劑量組小鼠胃粘膜炎癥程度與模型組沒有明顯差異。5.與空白組小鼠比較，模型組小鼠血清 IFN-γ顯著增高，三聯(lián)組和頭花蓼高劑量組小鼠 IFN-γ明顯降低，有顯著性差異(P＜0.05)；中西藥聯(lián)合各個(gè)劑量組沒有明顯變化。Hp感染

7、后及各治療組小鼠血清IL-4沒有顯著性變化。6. Hp感染小鼠胃粘膜IFN-γ轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)9倍，IL-4轉(zhuǎn)錄水平下調(diào)7.7倍。頭花蓼高中劑量組和三聯(lián)組小鼠胃粘膜IFN-γmRNA的轉(zhuǎn)錄水平分別下調(diào)6.7倍、3.7倍和6.3倍，與模型組比較有顯著性差異（P＜0.05）。與模型組比較，三聯(lián)組和頭花蓼高劑量組小鼠胃粘膜IL-4轉(zhuǎn)錄水平分別上調(diào)4倍和4.8倍，中劑量組和低劑量組也顯著上調(diào)，與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)

8、論：
　　1.頭花蓼對(duì)HpSS2000具有明顯的抑菌效果，其MIC為4mg/mL，且抑菌活力與藥物濃度成正比。
　　2.頭花蓼在體外具有刺激ConA活化的淋巴細(xì)胞分泌IFN-γ和IL-4的能力，且刺激IFN-γ的能力與頭花蓼濃度有關(guān)。
　　3.頭花蓼高劑量組具有明顯改善Hp相關(guān)性胃炎的能力。
　　4. Hp感染時(shí)小鼠全身免疫反應(yīng)及胃粘膜局部反應(yīng)發(fā)生 Th1應(yīng)答優(yōu)勢(shì)，Hp感染后胃粘膜的炎癥反應(yīng)性損傷可能與Th1產(chǎn)生