IL-18抑制大腸癌SW480細(xì)胞新生血管形成及抗腫瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:應(yīng)用IL-18基因修飾的大腸癌SW480細(xì)胞裸鼠腫瘤模型，研究抑制腫瘤新生血管形成及抗腫瘤作用，為臨床大腸癌的生物治療提供依據(jù)。 方法: 1.體外培養(yǎng)人大腸癌SW480、pEGFP-sw480、hIL-18-pEGFP-sw480三組細(xì)胞株。 2.單克隆pEGFP-sw480、hIL-18-pEGFP-sw480細(xì)胞的篩選。 3.高IL-18表達(dá)的hIL-18-pEGFP-sw480細(xì)胞株的選取與鑒

2、定。 4.建立SW480、pEGFP-sw480、hIL-18-pEGFP-sw480三組裸鼠人大腸癌移植瘤模型。裸小鼠15只，隨機(jī)分為3組：B.SW480組5只：C.pEGFP-sw480組5只：A.hIL-18-pEGFP-sw480組5只。每組多設(shè)動(dòng)物1只，以備意外死亡時(shí)補(bǔ)充。觀察移植瘤生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移情況。 5.免疫組織化學(xué)法檢測(cè)移植瘤組織HIF-1a、VEGF、MMP-9及CD34表達(dá)，ELISA法檢測(cè)裸鼠血清IL-

3、18表達(dá)量。6.TUNEL法檢測(cè)移植瘤組織凋亡情況。 結(jié)果: 1.成功篩選出單克隆pEGFP-sw480、hIL-18-pEGFP-sw480細(xì)胞，其中hIL-18-pEGFP-sw480細(xì)胞高表達(dá)IL-18。 2.成功建立裸鼠人結(jié)腸癌移植瘤模型，15只裸鼠均成瘤，至實(shí)驗(yàn)?zāi)┚鶡o(wú)死亡。 3.腫瘤模型成瘤潛伏期：hIL-18-pEGFP-sw480組26.2±1.78天。SW480、pEGFP-sw480組分

4、別為14.6±1.94天和14.8±2.77天。六周后各組腫瘤平均體積：hlL-18-pEGFP-sw480組為336.39+28.50mm3，SW480組與pEGFP-sw480組分別為957.96±91.55mm3、1029.08±114.84mm3。hIL-18-pEGFP-sw480組與SW480組、pEGFP-sw480組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。SW480組與pEGFP-sw480組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 4.ELISA

5、及免疫組化檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：IL-18表達(dá)組MMP-9、VEGF及HIF-1a灰度值高于不表達(dá)組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即hIL-18-pEGFP-sw480組IL-18表達(dá)量分別為68.473、44.116、65.451、76.286、85.473pg/ml，MMP-9、VEGF及HIF-1a分別為143±6.82、140.8±9.24、150±6.12。SW480組與pEGFP-sw480組分別為110±5.93、107.3±4.92、10

6、3.3±6.24和114±5.36、108±8.69、103.6±5.83。 5.微血管密度(MVD)檢測(cè)結(jié)果顯示：hIL-18-pEGFP-sw480組9.08±4.01與SW480組、pEGFP-sw480組33.32±3.39、32.48±8.84之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 6.凋亡檢測(cè)結(jié)果(凋亡陽(yáng)性率)顯示：hIL-18-pEGFP-sw480組為30.32±7.23與SW480組、pEGFP-sw480組5.8±2