辛伐他汀對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞SW480的體外作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：通過(guò)研究辛伐他汀 (Simvastatin) 對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞SW480的體外作用，觀察辛伐他汀聯(lián)合抗癌藥物奧沙利鉑(Oxaliplation)對(duì)SW480細(xì)胞體外作用的影響，進(jìn)一步闡明辛伐他汀抑制腫瘤細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)凋亡的可能機(jī)制，并探討其用于結(jié)腸癌治療及化學(xué)預(yù)防的可行性。 方法：1體外培養(yǎng)人結(jié)腸癌細(xì)胞SW480，采用四甲基偶氮唑藍(lán) (tetrzolium-based colorimetric assay，MTT) 比色法檢

2、測(cè)辛伐他汀對(duì)該細(xì)胞增殖的影響；流式細(xì)胞儀測(cè)定辛伐他汀對(duì)SW480細(xì)胞周期分布和凋亡的影響；光學(xué)顯微鏡及透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變；采用流式細(xì)胞術(shù) (flow cytometry，F(xiàn)CM)半定量檢測(cè)辛伐他汀處理細(xì)胞48h后bcl-2、cyclindl蛋白的表達(dá)水平。2采用MTT比色法檢測(cè)辛伐他汀與抗癌藥物奧沙利鉑聯(lián)合應(yīng)用對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞SW480的增殖抑制作用，采用金氏公式<'[1]>分析相互作用指數(shù) (Iteraction Index)，

3、評(píng)價(jià)聯(lián)合后的作用，如q>0.85表示相加作用，q<0.85為拮抗作用；流式細(xì)胞儀檢測(cè)辛伐他汀聯(lián)合不同濃度奧沙利鉑對(duì)細(xì)胞凋亡的影響。 結(jié)果：1 MTT 比色法顯示辛伐他汀(2、5、10、2μmol/L)對(duì)SW480細(xì)胞增殖具有抑制作用。不同濃度辛伐他汀處理細(xì)胞24～72h后，與對(duì)照組相比，各處理組OD值均有不同程度下降，差異具有極顯著性(P<0.01)。各實(shí)驗(yàn)組間比較，差異亦具有極顯著性(P<0.01)。且隨辛伐他汀處理濃度的增大

4、、作用時(shí)間的延長(zhǎng)，OD 值逐漸下降，即辛伐他汀對(duì)SW480細(xì)胞的增殖抑制作用呈明顯的時(shí)間－劑量依賴效應(yīng)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期分布顯示，0、2、5、10、20μmol/L辛伐他汀作用SW480細(xì)胞48h后，隨藥物濃度增大，G0/G1期細(xì)胞逐漸增多，S期細(xì)胞逐漸減少，G2/M期細(xì)胞變化不明顯。即辛伐他汀可阻滯SW480胞周期進(jìn)程于G0/G1期，該作用呈劑量－效應(yīng)依賴關(guān)系。0、5、10、20μmol/L 辛伐他汀處理細(xì)胞48h后，流式細(xì)胞儀

5、可測(cè)得典型的亞二倍體凋亡峰，依辛伐他汀濃度增大而逐漸升高，凋亡百分率分別為：1.97％、11.71％、26.66％、34.07％。光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)結(jié)果顯示：未經(jīng)藥物作用的細(xì)胞呈菱形或梭形，形態(tài)飽滿，而用藥組細(xì)胞皺縮，破裂，呈不規(guī)則形，有的細(xì)胞兩端出現(xiàn)細(xì)長(zhǎng)的偽足，細(xì)胞胞漿中出現(xiàn)空泡，脫落細(xì)胞增多。透射電鏡下觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，細(xì)胞體積縮小，胞質(zhì)濃縮，胞核向外呈銳角突起，染色質(zhì)高度濃縮，電子密度增高，邊集于核膜下或呈新月?tīng)睿械某霈F(xiàn)

6、核固縮。流式細(xì)胞儀間接分析細(xì)胞bcl-2、cyclindl蛋白表達(dá)顯示，0、5、10、20μmol/L辛伐他汀處理SW480細(xì)胞48h后，bcl-2、cyclindl的熒光指數(shù)FI值隨處理濃度增大而逐漸減小。對(duì)于每一種蛋白，比較其處理組和對(duì)照組的FI值，差異均具有顯著性(P<0.05)。2 MTT 比色法分析辛伐他汀聯(lián)合奧沙利鉑對(duì)SW480細(xì)胞的增殖抑制作用，結(jié)果顯示：2、5、10μmol/L 的辛伐他汀可加強(qiáng)奧沙利鉑對(duì)SW480細(xì)胞的

7、增殖抑制作用。且隨辛伐他汀濃度的增大，其對(duì)奧沙利鉑的協(xié)同作用增強(qiáng)。金氏公式分析相互作用指數(shù)顯示，不同濃度奧沙利鉑聯(lián)合2、5、10μmol/L的辛伐他汀的 q 值均大于0.85。流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率結(jié)果顯示，2μmol/L 辛伐他汀與不同濃度奧沙利鉑聯(lián)合作用細(xì)胞48h后，細(xì)胞凋亡百分率隨奧沙利鉑濃度增高而增大，與對(duì)照組比較差異具有顯著性(P<0.05)，且與單用奧沙利鉑組比較差異具有顯著性(P<0.05)。 結(jié)論：1 HMG-

8、CoA還原酶抑制劑辛伐他汀具有抑制結(jié)腸癌細(xì)胞SW480增殖及誘導(dǎo)其凋亡的作用，為l臨床結(jié)腸癌的治療和化學(xué)預(yù)防提供了新的思路和理論依據(jù)。2辛伐他汀抑制結(jié)腸癌細(xì)胞SW480增殖的作用呈時(shí)間－劑量依賴關(guān)系。3 辛伐他汀阻滯結(jié)腸癌細(xì)胞SW480于G0/G1期并可誘導(dǎo)該細(xì)胞凋亡。4 辛伐他汀可通過(guò)下調(diào)bcl-2、cyclindl蛋白的表達(dá)而發(fā)揮其抑制結(jié)腸癌細(xì)胞SW480增殖、誘導(dǎo)該細(xì)胞凋亡的作用。5 辛伐他汀可協(xié)同奧沙利鉑對(duì)SW480細(xì)胞的增殖抑