肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)對(duì)體外培養(yǎng)的人退變髓核細(xì)胞生物學(xué)活性的影響.pdf

1、背景：
　　 椎間盤(pán)退變(intervertebral disc degeneration，IVD)是椎間盤(pán)突出、椎體滑脫、椎管狹窄等脊柱疾病的首要病因。研究證實(shí)，占椎間盤(pán)體積1％的髓核細(xì)胞在維持正常椎間盤(pán)細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)平衡以及在修復(fù)退變的椎間盤(pán)過(guò)程中發(fā)揮著核心作用。肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（hepatocyte growth factor，HGF）是人體中重要的細(xì)胞因子，存在于多種組織與細(xì)胞，發(fā)揮促進(jìn)細(xì)胞增殖、基質(zhì)表達(dá)、血管新生、抑制

2、細(xì)胞凋亡等作用，在生命的器官發(fā)生、形態(tài)形成、個(gè)體發(fā)育以及組織修復(fù)中發(fā)揮作用。通過(guò)肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)髓核細(xì)胞作用，研究髓核細(xì)胞增殖活性以及細(xì)胞外基質(zhì)表達(dá)變化，為修復(fù)退變的椎間盤(pán)尋求切實(shí)可靠的方法。
　　 目的：
　　 1.探討肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)對(duì)體外培養(yǎng)的人退變髓核細(xì)胞的生物學(xué)作用。
　　 2.研究肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子與胰島素樣生長(zhǎng)因子聯(lián)合作用對(duì)人退變髓核細(xì)胞的影響。
　　 方法：
　　 收集人退變髓

3、核組織標(biāo)本，分離培養(yǎng)髓核細(xì)胞；免疫組織化學(xué)法檢測(cè)髓核細(xì)胞Ⅱ型膠原表達(dá)，HE染色觀察細(xì)胞形態(tài)；免疫組化染色觀察HGF受體在髓核細(xì)胞中表達(dá)；設(shè)立HGF:0ng/ml、5ng/ml、50ng/ml、500ng/ml組，采用MTT法測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)，篩選HGF最佳作用濃度；選取第3代髓核細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)分HGF組、HGF+IGF組、IGF組、對(duì)照組，RT-PCR檢測(cè)Ⅱ型膠原、蛋白多糖、SOX9 mRNA表達(dá)；流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定細(xì)胞增殖的周期。
　　

4、 結(jié)果：
　　 免疫組化Ⅱ型膠原染色可見(jiàn)細(xì)胞外和胞漿內(nèi)棕褐色顆粒；HE染色細(xì)胞核染成紫色；免疫組化顯示髓核細(xì)胞表達(dá)HGF受體；MTT法提示不同濃度肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)體外培養(yǎng)的人退變髓核細(xì)胞均有明顯的促增殖作用，與對(duì)照組相比差異均有意義,50ng/ml是實(shí)驗(yàn)中肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的最佳作用濃度；HGF、HGF+IGF、IGF刺激后髓核細(xì)胞進(jìn)入增殖期比例增加，同時(shí)促進(jìn)髓核細(xì)胞Ⅱ型膠原、蛋白多糖、SOX9mRNA表達(dá)量增加，其中HGF+IGF