苯妥英鈉對體外培養(yǎng)的人牙周韌帶細胞生物學(xué)活性的影響.pdf

1、目的： 苯妥英鈉(phenytoin，PHT)臨床上一直以系統(tǒng)治療癲癇類疾病、心律不齊以及神經(jīng)系統(tǒng)性疾病為主，且療效肯定。直到Shapiro于1958年首次將苯妥英鈉用于創(chuàng)傷愈合，并且取得積極的效果，其在創(chuàng)傷方面的療效及用藥方式才得到學(xué)者們的關(guān)注<'[1]>。目前，已有研究表明苯妥英鈉局部用藥可用于治療褥瘡性潰瘍、靜脈淤積性潰瘍、糖尿病性潰瘍、創(chuàng)傷、燒傷以及麻風(fēng)營養(yǎng)不良性潰瘍等<'[2]>。并且也有研究表明，苯妥英納對動物成骨細

2、胞、巨噬細胞及人正常牙齦成纖維細胞等的增殖和分化有促進作用<'[3-5]>。因此，我們一定程度上可推理出苯妥英鈉用于牙周組織再生的可能性。 牙周韌帶細胞(human periodontal ligament cells，hPDLCs)作為牙周組織中的主要功能細胞，具有多向分化潛能，在創(chuàng)傷修復(fù)和組織再生中發(fā)揮重要作用。本研究在體外培養(yǎng)人牙周韌帶細胞的基礎(chǔ)上，觀察不同濃度苯妥英鈉對牙周韌帶細胞生物學(xué)活性的影響，并探討其用于促進牙周組

3、織再生的可能性，為進一步研究牙周組織再生提供一種新的藥物治療方法以及為后期體內(nèi)動物實驗提供一定的理論依據(jù)。 方法： 牙周韌帶細胞來自因正畸需要而拔出的健康前磨牙，將組織塊放入DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)，達匯合點后細胞傳代，第3～5代細胞用于實驗。 1．將牙周韌帶細胞以2×10<'4>個/ml接種于96孔板中，24小時后分別加入苯妥英鈉(0，1，5，20，100，500，2500μg/ml)，與細胞共同孵育3～4天后，用

4、MTT法測增殖活性，用PNPP法測ALP的活性，用考馬斯亮藍法測定細胞總蛋白含量。 2．將牙周韌帶細胞以5×10<'4>個/ml接種于24孔板中，24小時后加入礦化液(含15﹪FBS、10mmol/L β-甘油磷酸鈉、10<'4>mmol/L地塞米松、50mg/L抗壞血酸的DMEM培養(yǎng)液)不同濃度的苯妥英鈉(分別為0，20，100，500μg/ml)，共同孵育28天后，用Von Kossa法測細胞礦化形成的能力。 3．

5、將牙周韌帶細胞以1×10<'6>個/ml接種于6孔板中，24小時后加入藥物(20、100μg/ml3的苯妥英鈉液)，共同孵育24小時后，裂解牙周韌帶細胞，低溫離心取上清，用ELISA法測BMP-2的含量。 結(jié)果： 1．在1～100μg/ml藥物濃度范圍內(nèi)，細胞呈現(xiàn)典型的梭形或紡錘形外觀。在20～100μg/ml的濃度范圍內(nèi)，苯妥英鈉對hPDLCs的增殖表現(xiàn)出顯著的促進作用(P<0.01)。至500μg/ml時苯妥英鈉的增

6、殖效應(yīng)開始下降，且與100μg/ml濃度組相比增殖效應(yīng)顯著下降(P<0.01)。在2500μg/ml時則出現(xiàn)明顯的細胞毒性，抑制細胞增殖(P<0.01)。苯妥英鈉在20μg/ml時即開始顯著增強ALP的活性(P<0.01)，至100μg/ml時，藥物達到最大的效應(yīng)濃度(P<0.01)。至2500μg/ml時對ALP活性具顯著抑制作用。在<100μg/ml濃度時，苯妥英鈉濃度依賴性增加hPDLCs的蛋白合成，至100μg/ml時，藥物達到

7、最大的促蛋白合成能力(P<0.05)。苯妥英鈉在500μg/ml時，蛋白合成能力開始下降，但與100μg/ml濃度組無顯著性差異。至2500μg/ml時，伴隨苯妥英鈉對細胞毒性作用的發(fā)揮，與其它所有實驗組及對照組相比，蛋白合成受到顯著抑制(P<0.01)。 2．共同孵育28天后，四組之間礦化率有顯著性差異 (P<0.05)，而濃度100μg/ml時，藥物具有最大的促礦化作用(P<0.01)。在500μg/ml時，藥物作用開始下降

8、，與100μg/ml濃度組相比顯著下降(P<0.01)。 3．與對照組相比，在濃度20μg/ml和100μg/ml時，苯妥英鈉能顯著促進PDLCs中BMP-2的表達(分別為P<0.05，P<0.01)。 結(jié)論： 苯妥英鈉在一定濃度范圍內(nèi)(20～100μg/ml)可提高牙周韌帶細胞的增殖活性、ALP活性、總蛋白合成、礦化能力及促進，BMP-2的合成。可見，適當濃度的苯妥英鈉對 hPDLCs的增殖和分化有促進作用，并