堿性成纖維生長因子對牙齦間充質干細胞生物學性能的影響.pdf

1、目的：間充質干細胞具有自我復制、高度增殖和多向分化的能力，在組織與器官的修復再生方面有重要的作用。牙齦組織具有很強的組織愈合能力，取材容易、方便，并且愈合后無疤痕形成。牙齦組織中也存在著間充質干細胞，和其他間充質干細胞一樣，具有基本的干細胞特性，并且具有免疫調節(jié)功能。本課題旨在體外研究堿性成纖維生長因子對牙齦間充質干細胞生物學特性的影響，為組織再生提供合適的種子細胞和細胞生長因子。
　　方法：
　　第一部分 GMSC的分離培

2、養(yǎng)和鑒定
　　1、GMSC的分離培養(yǎng)：在家長知情同意下，取臨床中全身健康的接受冠延長手術患者，術中切去的牙齦組織，采用酶消化法進行分離、培養(yǎng)。
　　2、GMSC的鑒定：通過檢測GMSC的克隆形成能力、多向分化潛能（成骨分化能力、成脂分化能力）、間充質干細胞表面標記物（STRO-1、CD146、CD90、CD105、CD45、CD34），對分離、培養(yǎng)的GMSC進行鑒定。
　　第二部分 bFGF對GMSC生物學特性的影響<

3、br>　　1、GMSC的分離培養(yǎng)鑒定：在家長知情同意下，取臨床中全身健康的接受冠延長手術患者，術中切去的牙齦組織，采用酶消化法進行分離、培養(yǎng)。通過檢測GMSC的克隆形成能力、多向分化潛能（成骨分化能力、成脂分化能力）、間充質干細胞表面標記物（STRO-1、CD146、CD90、CD105、CD45、CD34），對分離、培養(yǎng)的GMSC進行鑒定。
　　2、bFGF對GMSC生物學特性的影響的研究：通過繪制生長曲線、CCK-8法研究bF

4、GF對GMSC增殖能力的影響。流式細胞術檢測bF GF對GMSC表達S TRO-1的影響。成骨誘導后通過檢測磷酸酶活性、茜素紅染色及鈣離子濃度測定、Rea l Time RT-PCR在mRNA水平檢測成骨分化相關基因BSP、OCN、ALP的表達，研究bFGF對GMSC成骨分化能力的影響。成脂誘導后通過油紅O染色、Real Time RT-PCR在mRNA水平檢測成脂分化相關基因LPL、PPARG的表達，研究bFGF對GMSC的成脂分化能

5、力的影響。
　　結果：
　　第一部分 GMSC的分離培養(yǎng)和鑒定
　　1、GMSC的分離培養(yǎng)：從人牙齦組織中分離出的細胞貼壁生長，細胞成梭形，部分區(qū)域形成克隆。
　　2、GMSC的鑒定：GMSC具有克隆形成能力，成骨分化、成脂分化等多向分化潛能，表達間充質干細胞特異性表面標記物，S TRO-1、CD146、CD90、CD105，不表達內皮及造血干細胞的表面標記物CD45、CD34，表明細胞具有間充質干細胞的特征。<

6、br>　　第二部分 bFGF對GMSC生物學特性影響的研究
　　1、GMSC的分離培養(yǎng)鑒定：同上
　　2、bFGF對GMSC生物學特性影響的研究：細胞生長曲線及CCK-8結果顯示bFGF促進 GMSC的增殖能力，差異具有統(tǒng)計學意義。堿性磷酸酶活性、茜素紅染色、鈣離子定量分析、Real Time RT-PCR結果顯示bFGF抑制了GMSC的成骨分化能力。油紅O染色、Real Time RT-PCR結果顯示bFGF促進GMSC的