土壤微生物DNA純化及PCR-SSCP分析技術(shù)的研究.pdf

1、尖鐮孢致病菌是一個(gè)世界性的土傳植物病害,這類致病菌能引起大約80多種植物的枯萎疾病,造成極大的農(nóng)作物和觀賞植物的損失.隨著枯萎病化學(xué)防治的逐漸淘汰,尋找生物防治制劑,理解致病性尖鐮孢菌與土壤微生物群體之間的相互關(guān)系顯得刻不容緩.枯萎病的天然抑菌土壤已被發(fā)現(xiàn),它們的生物學(xué)機(jī)制研究表明,土壤微生物種群結(jié)構(gòu)在抑菌土壤中起著主要作用.本文擬從分子水平上開(kāi)展尖鐮孢致病菌和根際微生物生態(tài)分布研究,為今后進(jìn)一步分析尖鐮孢致病菌與根際微生物的相互關(guān)系提

2、供研究基礎(chǔ). 為了研究土壤微生物的種群變化,須從土壤中直接提取土壤微生物總基因組DNA,土壤DNA直接提取過(guò)程中腐殖物質(zhì)污染是目前土壤微生物研究的一大障礙.它經(jīng)常導(dǎo)致隨后的PCR失敗和引入分析偏差.許多商業(yè)試劑盒已被開(kāi)發(fā)出來(lái)用于土壤DNA純化,但至今這些商業(yè)試劑盒仍不能有效地去除腐殖物質(zhì)污染.我們摸索出了一種非常有效的去除腐殖物質(zhì)方法.首先用過(guò)量Al<'3+>離子凝聚土壤中的腐殖物質(zhì),然后,通過(guò)調(diào)整pH去除剩余的Al<'3+>離子,最后

3、通過(guò)SDS裂解釋放土壤微生物DNA.這種方法被證明是在DNA產(chǎn)量和去除腐殖物質(zhì)上優(yōu)于UltraClean土壤試劑盒.對(duì)各種土壤DNA直接提取具有廣泛的應(yīng)用性. 為了從分子水平上開(kāi)展尖鐮孢致病菌生態(tài)分布研究,我們研究了從土壤中篩選和鑒別尖鐮孢菌株的方法.利用Komada培養(yǎng)基從西瓜根際土壤中篩選尖鐮孢菌,利用可變pH電泳介質(zhì)(TME)和低溫組合的單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析(SSCP)鑒別這些尖鐮孢菌.我們發(fā)現(xiàn)TME是一種好的電泳介質(zhì).它的