慢病毒介導(dǎo)P63基因轉(zhuǎn)染人脂肪干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:以慢病毒為載體，將P63基因轉(zhuǎn)染到體外培養(yǎng)的脂肪干細(xì)胞上，獲得P63基因高表達(dá)的脂肪干細(xì)胞，為進(jìn)一步研究脂肪肝細(xì)胞向表皮的分化奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法:(1)無菌條件下獲取健康男性的腹部脂肪，消化法分離脂肪干細(xì)胞，體外培養(yǎng)、擴(kuò)增，凍存?zhèn)溆谩?2)脂肪干細(xì)胞的鑒定:形態(tài)學(xué)檢測、多向分化能力及表面標(biāo)記物檢測。(3)慢病毒載體介導(dǎo)P63基因轉(zhuǎn)染人脂肪干細(xì)胞。(4)將轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞進(jìn)行PCR及Western Blot檢測。
　　

2、結(jié)果:分離培養(yǎng)后，細(xì)胞貼壁生長，形態(tài)呈梭形，并呈旋渦狀或放射狀排列;細(xì)胞生長曲線為典型的“S”形;成脂誘導(dǎo)分化的細(xì)胞經(jīng)油紅O染色為陽性，對照組為陰性;成骨誘導(dǎo)分化的細(xì)胞經(jīng)茜素紅染色為陽性，對照組為陰性。流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示CD14和CD45為陰性，CD29、CD44、CD105為陽性。轉(zhuǎn)染后的脂肪干細(xì)胞有明顯的P63及角蛋白表達(dá)。
　　結(jié)論:通過外科手術(shù)獲得的人體脂肪組織中含有脂肪干細(xì)胞，經(jīng)體外培養(yǎng)擴(kuò)增后，以慢病毒為載體，轉(zhuǎn)染P