慢病毒介導(dǎo)Hvegf-165基因轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療大鼠后肢缺血實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:檢測分析攜人血管內(nèi)皮生長因子-165基因骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對大鼠缺血后肢的治療效果,為下肢缺血的臨床治療提供新思路。
　　 方法:本實(shí)驗(yàn)設(shè)立三個實(shí)驗(yàn)組,分別為轉(zhuǎn)染hVEGF-165基因BMSC組、BMSC組、空白對照組,每組有效樣本8例,共48條肢體。采用結(jié)扎SD大鼠腹主動脈分叉處上方建立缺血模型,并通過術(shù)后觀察、DSA血管造影、測股動脈血流速度及阻力檢測鑒定;通過慢病毒介導(dǎo)hVEGF-165基因轉(zhuǎn)染大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,G

2、FP熒光蛋白標(biāo)記,熒光顯微鏡下檢測hVEGF-165基因轉(zhuǎn)染率;再采用大鼠后肢肌肉多點(diǎn)注射方法將1×106/ml濃度的干細(xì)胞移植到缺血的肢體內(nèi),一個月后通過觀察、DSA血管造影、測股動脈血流速度及血流阻力檢測療效。
　　 結(jié)果:1、熒光顯微鏡下檢測慢病毒介導(dǎo)hVEGF-165基因轉(zhuǎn)染BMSCs陽性率可達(dá)85％以上;2、采用結(jié)扎腹主動脈法制作缺血模型,術(shù)后30天所有大鼠出現(xiàn)跛行,足趾壞死,絕大部分大鼠肢體出現(xiàn)缺血性潰瘍。彩色多普勒

3、超聲、后肢血管造影等檢查顯示結(jié)扎術(shù)后實(shí)驗(yàn)大鼠后肢血流、阻力指數(shù)顯著下降,血管密度顯著減少。3、移植術(shù)后30天檢測療效,大鼠后肢血流速度、阻力指數(shù)與微血管密度轉(zhuǎn)基因BMSC組、BMSC組均明顯高于空白對照組,而轉(zhuǎn)基因BMSC組高于BMSC組(p＜0.01)。
　　 結(jié)論:慢病毒載體介導(dǎo)hVEGF-165基因轉(zhuǎn)染BMSC陽性率高;采用SD大鼠腹主動脈分叉處上方結(jié)扎法制作后肢缺血模型缺血效果明顯,持續(xù)時間長;相同移植條件下的攜hVEG