甲狀腺激素對(duì)大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞再生的影響.pdf

1、目的：應(yīng)用硝基藍(lán)四唑鹽(NBT)法、HE染色和磁分離均相酶聯(lián)免疫法等方法觀察睪丸間質(zhì)細(xì)胞(Leydigcells,LCs)被二甲磺基乙烷(ethanedimethanesulphonate，EDS)破壞后在甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)和甲狀腺機(jī)能減退情況下的再生情況，探討甲狀腺激素對(duì)成熟大鼠LCs再生的影響。 方法：選用90日齡雄性SD大鼠54只，EDS一次性腹腔注射(85mg/kg)破壞LCs。將54只EDS處理后的大鼠隨機(jī)分為三組：甲狀腺

2、機(jī)能亢進(jìn)組、甲狀腺機(jī)能減退組和對(duì)照組，每組18只。 甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)組大鼠在注射EDS當(dāng)日起每天皮下注射T3(60μg/kg)一次，造成甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)模型；甲狀腺機(jī)能減退組大鼠在注射EDS當(dāng)日起每天用50mg丙硫氧嘧啶水溶液灌胃一次，建立甲狀腺機(jī)能減退模型；對(duì)照組大鼠在注射EDS當(dāng)日起每天皮下注射含0.025MNaOH的生理鹽水0.8ml。 分別在注射EDS后的第7天、14天和21天麻醉大鼠、取材，進(jìn)行如下指標(biāo)的觀察：①L

3、Cs的再生情況：取睪丸-70℃速凍，Leica冰凍切片機(jī)切片，片厚15μm，NBT法顯示LCs內(nèi)的3β-HSD酶，判定LCs的再生情況。②LCs的功能：取睪丸組織體外培養(yǎng)，加入黃體生成素(LH)后，采用磁酶免法檢測(cè)上清液中睪酮的含量；下腔靜脈取血，離心取血清，磁酶免法檢測(cè)血清中睪酮的含量。③LCs的形態(tài)和數(shù)量：取睪丸，10％福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋、切片，HE染色，光鏡下觀察LCs形態(tài)和數(shù)量的變化。 結(jié)果：1NBT染色結(jié)果1.

4、1甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)組：第7天未觀察到3β-HSD陽(yáng)性細(xì)胞，第14天開(kāi)始出現(xiàn)少量藍(lán)紫色陽(yáng)性細(xì)胞團(tuán)即新生的LCs，第21天出現(xiàn)大量藍(lán)紫色陽(yáng)性細(xì)胞團(tuán)；第21天的3β-HSD陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯多于第14天(P＜0.05)。 1.2甲狀腺機(jī)能減退組：第7天、14天、21天三個(gè)時(shí)間點(diǎn)，均未觀察到3β-HSD陽(yáng)性細(xì)胞。 1.3對(duì)照組：第7天、14天均未觀察到3β-HSD陽(yáng)性細(xì)胞；第21天可見(jiàn)少量陽(yáng)性細(xì)胞，但陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)顯著低于甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)組

5、(P＜0.05)。 2LCs的功能2.1甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)組：第7天，睪丸組織體外培養(yǎng)孵育液和血清中均未檢測(cè)到睪酮；第14天、21天均可檢測(cè)到睪酮。第21天的睪酮水平明顯高于第14天(P＜0.05)；在相同的時(shí)間點(diǎn)，睪丸組織體外培養(yǎng)孵育液中的睪酮水平顯著高于血清中的睪酮水平(P＜0.05)。 2.2甲狀腺機(jī)能減退組：第7天、14天、21天睪丸組織體外培養(yǎng)孵育液和血清中均未檢測(cè)到睪酮。 2.3對(duì)照組：第7天、14天睪丸

6、組織體外培養(yǎng)孵育液和血清中均未檢測(cè)到睪酮。第21天可檢測(cè)到睪酮，睪丸組織體外培養(yǎng)孵育液中的睪酮含量明顯高于血清中的睪酮含量(P＜0.05)；第21天，對(duì)照組睪丸組織體外培養(yǎng)孵育液和血清中的睪酮含量均顯著低于甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)組(P＜0.05)。 3HE染色結(jié)果3.1甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)組：第7天未觀察到LCs；生精小管破壞、呈不規(guī)則形，生精細(xì)胞缺失。第14天可見(jiàn)睪丸間質(zhì)中出現(xiàn)少量新生的LCs，細(xì)胞呈圓形，單個(gè)存在，核大而圓，胞質(zhì)較少。第2

7、1天，睪丸間質(zhì)中可見(jiàn)大量成團(tuán)的LCs；生精小管的形狀逐漸恢復(fù)成圓形或橢圓形，生精細(xì)胞數(shù)量增多。 3.2甲狀腺機(jī)能減退組：第7天、14天、21天HE染色均未觀察到LCs；生精小管破壞，生精細(xì)胞缺失。 3.3對(duì)照組：第7天、14天未觀察到LCs，生精小管和生精細(xì)胞的變化與甲狀腺機(jī)能減退組類似。第21天可見(jiàn)新生的LCs，細(xì)胞形態(tài)同甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)組類似，生精小管和生精細(xì)胞也逐漸恢復(fù)。 結(jié)論：1甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)組大鼠在EDS

8、處理后的第14天、21天睪丸3β-HSD陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯高于甲狀腺機(jī)能減低組和對(duì)照組，表明T3可促進(jìn)EDS處理后LCs的再生。 2甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)組大鼠在EDS處理后的第14開(kāi)始出現(xiàn)新生的LCs，第21天睪丸間質(zhì)中出現(xiàn)大量LCs，生精小管、生精細(xì)胞基本恢復(fù)至正常狀態(tài)，表明T3不但可以促進(jìn)EDS處理后LCs的再生，進(jìn)而可促進(jìn)生精細(xì)胞的恢復(fù)。 3甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)組大鼠，在EDS處理后的第14天、21天睪丸組織體外培養(yǎng)孵育液和血清中