循環(huán)microRNAs208a,208b在急性ST段抬高心肌梗死診斷中的價(jià)值.pdf

1、急性心肌梗死（Acute myocardial infarction，AMI）已經(jīng)成為使全球范圍內(nèi)的致死和致殘率上升的主要原因之一。急性心肌梗死(AMI)是指冠狀動(dòng)脈急性閉塞，出現(xiàn)持久而嚴(yán)重的心肌缺血所致的局部心肌急性壞死。最新研究表明，循環(huán)微小RNA(microRNA，miRNAs，miRs)可以輔助多種系統(tǒng)疾病的早期診斷。
　　目的:
　　本研究的主要目的在于探討心肌特異性miR-208a、miR-208b作為急性心ST

2、段抬高型肌梗死(acute STEMI)診斷指標(biāo)的能力，并與cTnⅠ水平進(jìn)行比較。分析miR-208a/b與心臟型脂肪酸結(jié)合蛋白(h-FABP)、高敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)、脂質(zhì)以及左心室射血分?jǐn)?shù)之間的相關(guān)性。
　　因此將研究分成6個(gè)部分:
　　1.采用實(shí)時(shí)定量PCR(qRT-PCR)檢測(cè)急性ST段抬高心肌梗死后心肌血漿miRNAs(mir208a和mir208b)的水平。
　　2.評(píng)估循環(huán)miR-208a/b早期

3、診斷AMI的可行性。
　　3.評(píng)估m(xù)iR-208a和miR-208b的診斷價(jià)值，并與當(dāng)前的金標(biāo)準(zhǔn)cTnⅠ和CK-MB進(jìn)行比較。
　　4.采用ELISA法檢測(cè)急性STEMI患者血漿h-FABP和hs-CRP水平，并探討它們與心肌特異性miRNAs(mir208a和mir208b)的相關(guān)性。
　　5.評(píng)估m(xù)iR-208a/b與血脂的相關(guān)性。
　　6.通過二維超聲心動(dòng)圖檢測(cè)左室射血分?jǐn)?shù)，并評(píng)估其與心肌特異性miRNAs

4、(mir208a和mir208b)的相關(guān)性。
　　方法:
　　分別對(duì)列入選自2012年12月至2013年10月，癥狀發(fā)作后12h內(nèi)入住天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院CCU病房的39例急性ST段抬高心肌梗死(STEMI)患者，25例不穩(wěn)定心絞痛(UAP)患者，以及29例參加健康預(yù)防保健項(xiàng)目的心電圖正常、臨床確診無心血管疾病的健康人。本研究經(jīng)天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，取得了所有患者知情同意。
　　取血時(shí)間為AMI發(fā)病后

5、12h內(nèi)(3.5±2.93)。抽取2.5ml外周靜脈血于ETDA管中，2h內(nèi)在4℃條件下2000g離心15min，分離血漿轉(zhuǎn)移至新的無RNA酶的試管中，并存儲(chǔ)于-80℃直至RNA分離。第一份血液樣本采集于患者剛?cè)胱」谛牟”O(jiān)護(hù)病房(CCU)時(shí)，另一份則采集于次日早上6點(diǎn)(發(fā)病后16.46±4.98h)。另外，于招收時(shí)，抽取29例健康人的血漿樣本一次作為健康對(duì)照組，且正常健康人靜脈血均來自清晨空腹。對(duì)所有參與本研究項(xiàng)目的患者血標(biāo)本的miR-

6、208a、miR-208b表達(dá)水平進(jìn)行測(cè)定，并與標(biāo)準(zhǔn)生物標(biāo)志物cTnⅠ進(jìn)行比較。從400μL血漿樣本，提取miRNA，使用miRNA cDNA第一鏈合成試劑盒（康為世紀(jì)，中國），將提取的miRNA反轉(zhuǎn)錄成單鏈cDNA。利用SYBR實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCRs)檢測(cè)血漿中miR-208a和miR-208b的表達(dá)量。目前，還沒有統(tǒng)一的使用于qRT-PCR的特定內(nèi)參。所有qRT-PCR采用相對(duì)定量進(jìn)行分析，以hsnRNA U6(

7、HmiRQP9001，GeneCopoeia)作為內(nèi)參進(jìn)行校正和標(biāo)準(zhǔn)化。采用2-△△Ct法分析相對(duì)表達(dá)量。根據(jù)制造商的說明，采用ELISA法測(cè)定血漿心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTnⅠ)，CK-MB，hs-CRP和h-FABP。左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)則采用2D二維超聲心動(dòng)圖測(cè)量。Student t檢驗(yàn)和Mann-Whitney U檢驗(yàn)分別用來對(duì)比兩組分類變量和連變量間的差異，多組間比較采用one way ANOVA或Kruskal-Wallis檢

8、驗(yàn)。Spearman等級(jí)相關(guān)分析用來描述兩個(gè)變量的相關(guān)性。ROC曲線及曲線下面積(AUC)用來評(píng)價(jià)血清miR-208a和miR-208b診斷的意義:P《0.05認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　急性STEMI患者血漿中miR-208a、miR-208b表達(dá)水平顯著高于健康對(duì)照組，分別為健康對(duì)照組的15.18倍(P＜0.001)和9.51倍(P＜0.001)。急性STEMI患者與健康對(duì)照組的miR-208a和miR-208

9、b的ROC曲線有明顯差異，曲線下面積(AUC)分別為0.955(95％可信區(qū)間0.912-0.999)，P=0.000和0.894(95％可信區(qū)間0.813-0.974)，P=0.000。這些心臟富集miR-208a、miR-208b的表達(dá)水平在UAP血漿中與健康對(duì)照組相比均略有上升，分別是健康對(duì)照組的5.39倍(P=0.000)和2.31倍(P=0.0009)。UAP患者與健康對(duì)照組的miR-208a和miR-208b的ROC曲線有明

10、顯差異，曲線下面積(AUC)分別為0.825，(95％CI0.702-0.948),P=0.000和0.705,(95％CI0.546-0.863),P=0.015。急性STEMI與UAP組的miR-208b表達(dá)水平之間有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.047)。
　　cTnⅠ具有良好的準(zhǔn)確性，以區(qū)分急性STEMI與UAP患者(曲線下面積AUC0.848，(95％CI0.743-0.954)，P=0.000。miR-208a與miR-2

11、08b的曲線下面積分別為0.659，(95％CI0.502-0.817)，P=0.040和0.695，(95％CI0.542-0.848)，P=0.012。急性STEMI發(fā)作后，上調(diào)的循環(huán)miR-208a和miR-208b水平在16.46±4.98小時(shí)后基本恢復(fù)到健康對(duì)照組水平(P＜0.05)。胸痛發(fā)作后，3個(gè)小時(shí)內(nèi)入院的急性STEMI患者中，26/26(100％)的患者的miR-208a有上升，23/26(88.46％)的患者的miR

12、-208b有上升，而僅有14/26(53.85％)的患者的cTnⅠ呈陽性。此外，循環(huán)miR-208a的表達(dá)與cTnⅠ呈正相關(guān)(P=0.027)。4/29(13.79％)的健康對(duì)照組的miR-208a呈假陽性，3/29(10.34％)的健康對(duì)照組的miR-208b呈假陽性，這表明，miR-208a與miR-208b的特異性分別為86.21％和89.66％。入院時(shí)，癥狀發(fā)作已超過3個(gè)小時(shí)以上的急性STEMI患者血漿中miR-208a、miR

13、-208b以及cTnⅠ表達(dá)水平均有升高。以上數(shù)據(jù)顯示，這些miRNAs對(duì)診斷AMI具有敏感性和特異性，提示miR-208a和miR-208b可以作為早期診斷AMI的生物標(biāo)志物。
　　急性STEMI患者的h-FABP表達(dá)水平明顯高于健康對(duì)照組P=0.002，與UAP患者相比P=0.600。h-FABP具有中等相關(guān)性，以區(qū)分AMI患者與健康對(duì)照組，曲線下面積AUC0.749(95％CI0.614-0.883)，P=0.002。h-FA

14、BP與miR-208a和miR-208b呈中等相關(guān)性(分別為rho=0.289，P=0.009和rho=0.320，P=0.003)。急性STEMI患者的血漿hs-CRP表達(dá)水平高于健康對(duì)照組(P=0.000)和UAP組(P=0，033)。UAP組的hs-CRP水平高于健康對(duì)照組，P=0.000。Hs-CRP可以很好的區(qū)分AMI患者與健康對(duì)照組，曲線下面積AUC of0.951(95％CI0.895-1.007)，P=0.000。miR

15、-208a和miR-208b的表達(dá)與hs-CRP呈中等正相關(guān)性(分別為Spearman rho=0.287，P=0.013和rho=0.346，P=0.002)。另外，根據(jù)研究顯示，急性STEMI患者血漿miR-208a、miR-208b分別與HDL呈負(fù)中等相關(guān)關(guān)系，分別為Spearman rho=-0.256，P=0.033和rho=-0.244,P=0.040.這兩個(gè)miRNAs與血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白

16、(LDL)和超低密度脂蛋白(VLDL)并無相關(guān)關(guān)系。并且，急性STEMI患者血漿miR-208a、miR-208b分別與左心室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)呈高度負(fù)相關(guān)關(guān)系，分別為rho=-0.602(P=0.000)和rho=-0.556(P=0.000)。
　　結(jié)論:
　　1、miR-208a、miR-208b表達(dá)水平在急性STEMI患者血漿中顯著高于健康對(duì)照組。
　　2、循環(huán)心臟特異性miR-208a和miR-208b可能

17、是潛在的早期、快速、準(zhǔn)確診斷AMI的生物標(biāo)志物。
　　3、血漿miR-208a和miR-208b的表達(dá)水平與炎癥標(biāo)志物hs-CRP和壞死標(biāo)志物h-FABP有相關(guān)性。另外，還與LVEF和HDL存在相關(guān)性。
　　4、循環(huán)心臟特異性miR-208a和miR-208b可能是AMI的預(yù)測(cè)標(biāo)志物。
　　5、這些miRNA可能從活體心肌細(xì)胞釋放入血液循環(huán)，對(duì)心肌起保護(hù)作用。
　　6、需要由規(guī)模大、設(shè)計(jì)合理的規(guī)范化研究對(duì)循環(huán)mi