oxLDL與食管癌的關(guān)聯(lián)及機理探討.pdf

1、研究目的：
　　 以食管鱗癌不同衍變階段的患者為研究對象,觀察氧化低密度脂蛋白(oxLDL)與食管鱗癌是否存在關(guān)聯(lián);如果存在關(guān)聯(lián),利用體外細胞培養(yǎng)實驗探討其可能的作用機理。
　　 研究內(nèi)容和方法：
　　 一.oxLDL與食管癌衍變階段的關(guān)聯(lián)性研究
　　 1.研究對象肥城市食管病變碘染色內(nèi)鏡篩檢及病理活檢確診的食管鱗狀上皮細胞正常33例,食管基底細胞增生37例,食管鱗狀細胞不典型增生47例,食管鱗狀細胞癌(

2、ESCC)43例。
　　 2.血脂指標測定血清總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)水平采用酶比色法測定;血清白蛋白以溴甲酚綠(BCG)法測定;oxLDL、oxLDL抗體(oxLDL-Ab)、oxLDL抗體lgG亞型(oxLDL-lgG)和lgM亞型(oxLDL-lgM)水平采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)方法測定。
　　 3.統(tǒng)計方法應用SPSS15.0統(tǒng)計軟件進行單因素分析或

3、多項式Logistic回歸分析,P＜0.05認為差異有統(tǒng)計學意義。
　　 二.oxLDL對人食管癌細胞株Eca109增殖的影響及機理探討
　　 1.甲基四唑藍(MTT)比色法檢測oxLDL及抗體成分對Eca109細胞株的增殖抑制率,oxLDL對阿霉素(ADM)所致Eca109細胞增殖抑制的影響。
　　 2.細胞凋亡指標的測定:吉姆薩染色光鏡下觀察細胞凋亡的形態(tài)學改變;流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡率和細胞周期改變。

4、>　　 3.RT-PCR和Western blot檢測oxLDL及其與ADM聯(lián)合對細胞凋亡相關(guān)基因及蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3表達水平的影響。
　　 結(jié)果：
　　 一.oxLDL與食管癌衍變階段的關(guān)聯(lián)性研究
　　 1.單因素分析顯示:食管癌衍變階段四組中,年齡、血清白蛋白、TC、HDL、LDL、oxLDL、oxLDL-Ab、oxLDL-lgG和oxLDL-lgM水平差異有顯著性,而其它因素差異沒

5、有統(tǒng)計學意義。
　　 2.隨著食管組織病變加重,血清oxLDL、oxLDL-Ab、oxLDL-lgG水平趨向降低,而oxLDL-lgM水平趨向上升。調(diào)整年齡、TC、LDL、HDL和血清白蛋白等混雜因素后,四組間oxLDL和oxLDL-lgM水平仍有顯著性差異;而血清oxLDL-Ab和oxLDL-lgG水平無顯著性差異。
　　 3.食管癌衍變階段與血清oxLDL、oxLDL-Ab、oxLDL-lgG水平呈顯著負相關(guān),而與o

6、xLDL-lgM水平呈顯著正相關(guān)。
　　 4.調(diào)整年齡、TC、LDL、HDL和血清白蛋白等混雜因素后,oxLDL值增加對食管癌有保護作用(OR=0.94,95％CI:0.89-0.99);而oxLDL-lgM增加不典型增生和食管癌的危險性,OR分別為1.11(95％CI:1.01-1.23)和1.18(95％CI:1.06-1.31)。
　　 二.oxLDL對人食管癌細胞株Eca109增殖的影響及機理探討
　　

7、1.對細胞增殖的影響
　　 1.1隨著oxLDL濃度的增加和作用時間的延長,Eca109細胞的存活率降低,且呈劑量-時間效應依賴關(guān)系。
　　 1.2 oxLDL-Ab及oxLDL-R-Ab對Eca109細胞的活性基本無影響;oxLDL-Ab對oxLDL所致的細胞活性抑制無顯著作用;而oxLDL-R-Ab可明顯減少oxLDL所致的細胞活性抑制作用(抑制率從27.73％降到7.31％,P＜0.05)。
　　 1.3隨

8、著ADM濃度的增加和作用時間的延長,Eca109細胞的存活率降低,且呈劑量-時間效應依賴關(guān)系。
　　 1.4 oxLDL可明顯增強ADM所致的細胞活性抑制(抑制率由ADM組的28.35％增至43.97％,P＜0.05),兩因素存在協(xié)同作用。
　　 2.對細胞凋亡的影響
　　 2.1 oxLDL及ADM使Eca109細胞出現(xiàn)凋亡形態(tài)改變,可見凋亡小體甚至核崩解。
　　 2.2隨著oxLDL濃度的增加和作用時

9、間的延長,Eca109細胞的凋亡率升高,有明顯的量效和時效依賴關(guān)系。
　　 2.3 oxLDL-Ab對oxLDL所致的細胞凋亡率無顯著作用;oxLDL-R-Ab可減低oxLDL所致的細胞凋亡(凋亡率從15.11％降到12.58％,P＜0.05)。
　　 2.4 oxLDL可使ADM誘導Eca109細胞的凋亡率由11.27％增至19.79％,P＜0.05,主效應及其交互作用都顯著,兩因素存在協(xié)同作用。
　　 3.對

10、細胞周期的影響
　　 3.1隨著oxLDL濃度的增加,Eca109細胞周期的S期和G2/M期比例逐漸增加,G0/G1期比例逐漸減少,出現(xiàn)S期阻滯。
　　 3.2 oxLDL-Ab和oxLDL-R-Ab基本不能改變細胞周期分布,oxLDL-Ab對oxLDL引起的細胞周期改變無影響;而oxLDL-R-Ab使oxLDL對細胞的S期阻滯作用降低(由29.86％降至24.97％,P＜0.05)。
　　 3.3 oxLDL和

11、ADM單獨作用使細胞的S期比例升高(由對照組的22.03％分別上升至29.86％和62.59％,P＜0.05),出現(xiàn)S期阻滯;oxLDL與ADM聯(lián)合使細胞的G2/M期比例增至75.66％,P＜0.05,細胞周期阻滯于G2/M期。
　　 4.對細胞凋亡相關(guān)基因和蛋白表達的影響
　　 oxLDL顯著降低Eca109細胞Bcl-2 mRNA和蛋白表達水平,升高Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表達水平,并使Bcl-2/

12、Bax比值降低。oxLDL和ADM聯(lián)合使Bcl-2 mRNA和蛋白表達水平較單獨作用組明顯降低,而Bax、Caspase-3mRNA和蛋白表達水平顯著升高。
　　 結(jié)論：
　　 1.隨著食管黏膜上皮細胞由正常到基底細胞增生到不典型增生再到食管鱗狀細胞癌病變的加重,oxLDL及oxLDL-Ab水平呈下降趨勢,與食管癌的發(fā)生呈負相關(guān);而oxLDL-lgM亞型抗體水平呈上升趨勢,與食管癌的發(fā)生呈正相關(guān)。
　　 2.ox